吸湿链霉菌A-125抗癌作用的研究

【摘要】：目的探讨吸湿链霉菌A-125发酵提取物对小鼠移植性肿瘤、肿瘤细胞株及肿瘤血管生长因子抑制作用的研究。在无血管状态下的恶性肿瘤很难生长,肿瘤诱导新生血管是其增殖与远端转移的重要生物学行为,肿瘤诱导新生血管与正常血管比较,在构筑上有很大差异。以阻断肿瘤血管生成为靶点,将成为肿瘤防治的一个重要新途径,是肿瘤治疗的方向之一。通过抗血管生成的治疗,可以限制和预防新生血管的形成,达到抑制肿瘤的生长及远端播散或转移的目的。方法血管生长因子抑制试验采用鸡胚绒毛尿囊膜试验:选取35只经7天孵化中的胚蛋,随机分成7组,在无菌条件下,选择血管稀疏部位开一个1.0cm×1.0cm小窗,前4组接种肿瘤血管生长因子50ug后,置37℃5%CO_2培养箱中孵化48h,分别于1、2、3组在原位接种吸湿链霉菌A-125发酵提取物25ug、50ug、100ug,4组为对照组,5、6、7组将肿瘤血管生长因子50ug分别与吸湿链霉菌A-125发酵提取物25ug、50ug、1 00ug混合后接种,置37℃培养箱72h,观察结果。体内抑瘤试验:选用肉瘤S-_(180)、肝癌H_(22)等瘤株。无菌抽取传代第7天的荷瘤小鼠腹水,以无菌生理盐水调整细胞数2.5×10~7/ml左右,每鼠于前肢腋窝皮下接种0.2ml,随机分为5组,每组10只,24小时后腹腔注射给药,每天一次,连续10天,末次给药后24小时,处死各组小鼠,称体重,解剖,剥离瘤块,称瘤重。计算抑制率。体外细胞毒试验(MTT):选用K_(562)白血病、Hela宫颈癌细胞株,将肿瘤细胞株用0.25%胰蛋白酶消化并制成细胞悬液,将细胞悬液接种在96孔细胞培养板中,每孔接种180ul(5×10~6/ml)。分别加入不同浓度的吸湿链霉菌A-125发酵提取物20ul,放置37℃孵育48h,然后加MTT 10ul/孔,将培养板置酶标光度计中,计算对肿瘤细胞株平均细胞生长抑制率及对细胞生长的半数抑制浓度。结果吸湿链霉菌A-125发酵提取物能明显抑制鸡胚绒毛尿囊膜的肿瘤血管的生成,当鸡胚接种肿瘤血管生长因子后,点样处周围毛细血管极其丰富,而加入吸湿链霉菌A-125发酵提取物时,毛细血管生长受到抑制,且随剂量增加作用增强。对小鼠移植性肿瘤有一定的抑制作用,其中对肉瘤S-_(180)的抑制率在30.8%46.5%,对肝癌H-_(22)抑制率在31.5-47.9%。对K_(562)白血病细胞株平均抑制率在28.8-88.4%;其对细胞生长半数抑制浓度IC_(50)为23.8ug/ml。对Hela宫颈癌细胞株平均抑制率在22.3-82.6%;其对细胞生长半数抑制浓度IC_(50)为47.4ug/ml。结论吸湿链霉菌A-125发酵提取物能明显抑制鸡胚绒毛尿囊膜肿瘤血管的生成,对小鼠移植性肿瘤有一定的抑制作用。对K_(562)白血病和Hela宫颈癌细胞株有显著的细胞毒作用。我们认为吸湿链霉菌A-125发酵提取物是一种很好的肿瘤血管生长因子抑制剂并有明显的抗癌作用。