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天麻多糖衍生物WS-45抗Ⅱ型登革病毒活性的研究

童贤崑  唐炜  邱宏  左建平  丁侃  
【摘要】:目的研究天麻多糖衍生物 WS-45体外抗Ⅱ型登革病毒(genus Flavivirus,Dengue virus Serotype 2,Den-2)的活性及其机制。方法在金黄地鼠肾传代细胞(BHK)上,以 MTT 法检测化合物 WS-45及其降解产物 WS-45-PHA 的细胞毒效应。以 Den-2体外感染 BHK 细胞为模型,MTT 法定量 Den-2感染后的细胞存活率,评价 WS-45及 WS-45-PHA 对病毒感染宿主细胞的保护作用;Realtime PCR 方法测定细胞培养上清中病毒载量,评价 WS45及 WS-45-PHA 的抗Ⅱ型登革病毒作用。采用病毒空斑形成抑制试验,结合不同实验处理条件,观察化合物 WS45对 Den-2复制过程(吸附、穿膜和胞内复制) 不同阶段的影响。结果 MTT结果显示,WS-45及 WS-45-PHA 在1000 μg·mL~(-1)以下对 BHK 细胞无细胞毒作用。WS45对于 Den-2引起的 BHK 细胞病变效应有较好的保护作用,半数有效浓度(EC50)为 (10.7±7.3)μg·mL~(-1);对于 Den-2感染 BHK 细胞上清中病毒载量有明显抑制作用,半数抑制浓度 (IC_(50))为(0.53±0.15)μg·mL~(-1);其降解产物体外抗病毒效果明显降低。在 Den-2感染 BHK 细胞的不同阶段(吸附、穿膜和胞内复制)进行空斑形成抑制实验,初步确认 WS-45主要作用途径是通过阻碍 Den-2对 BHK 细胞的吸附过程从而减少病毒感染细胞的机会达到抗病毒效果,对于病毒感染的穿膜和胞内复制无明显抑制作用。结论 WS45对 Den-2感染 BHK 细胞具有明显的抑制作用,该作用与 WS- 45阻碍 Den-2对 BHK 细胞的吸附有关。

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