收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

通过CRISPR/Cas9介导的基因打靶技术获得基因修饰的绒山羊

王小龙  朱海鲸  周建奎  牛怡源  师丙波  蔡蓓  周光现  姜雨  马保华  黄行许  屈雷  陈玉林  
【摘要】:CRISPR/Cas9基因编辑技术是基于细菌或古细菌CRISPR介导的获得性免疫系统衍生而来,由sgRNA通过碱基互补配对识别靶标DNA序列,指导Cas9核酸酶切割识别的双链DNA,诱发同源重组或非同源末端链接,进而实现在目的DNA上进行编辑。CRISPR/Cas9基因编辑技术具有操作简便、高效、特异性强、可同时操作多个基因等特点,已经广泛应用于多个物种中。由于其可进行精确的遗传编辑,从而加速家畜的遗传改良,已经在农业和生物医药方面得以应用。然而,这种方法在猪等大的动物模型中应用所表现出的适用性和高效性并没用被深入的研究。本研究选择绒肉兼用型品种陕北白绒山羊为试验动物,针对MSTN基因(肌肉抑制素基因,抑制肌肉生成)和FGF5基因(抑制毛囊发育及绒毛生长)分别各设计两条sgRNA,通过将Cas9 mRNA与sgRNA共同注射到山羊1细胞期胚胎中,我们成功地得到了单基因或多基因敲除的基因修饰绒山羊。在培养的山羊成纤维细胞中,MSTN基因和FGF5基因的打靶位点均实现了突变,靶向效率高于60%。与此同时,在98只获得的羔羊中,MSTN基因和FGF5基因的靶向效率分别为15%和21%,两个基因同时敲除的效率为10%。我们分别在成纤维细胞中、死胎的体组织以及睾丸组织中对目标突变以及脱靶突变进行了仔细的检测分析,发现CRISPR/Cas9基因编辑技术可以在大动物中对多个位点进行共同编辑修饰。我们进一步证实了CRISPR/Cas9基因编辑技术的实用性,MSTN基因和FGF5基因敲除的Cas9修饰山羊体现出了预期的表型(如:较快的生长发育速度和较长的羊毛长度)。除此之外,利用生殖细胞特异标记因子-VASA在基因编辑羔羊睾丸组织检测到生殖细胞的存在,证明了经过编辑修饰的等位基因同样具有遗传性,可以作为育种材料用于后续动物育种。通过与在猪等其他动物中进行的基因编辑研究相比,我们的结果证实了CRISPR/Cas9基因编辑技术可以作为一种强有力且有效的基因编辑工具用于家畜育种。

知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 龚恩学;提高绒山羊冬春季节舍饲效果的技术要点[J];辽宁畜牧兽医;2002年06期
2 孔繁臣;怎样养好绒山羊[J];新农业;2003年01期
3 陈佳涛;绒山羊圈养好处多[J];新农业;2003年02期
4 徐翠;饲养绒山羊应注意的几个问题[J];新农业;2003年03期
5 张会军,李勇刚;绒山羊圈养技术的调查[J];畜禽业;2003年06期
6 袁昌盛,韩喜会,汪晶华;秋季绒山羊管理要点[J];现代化农业;2003年11期
7 吴国明,王亚静,武国印;提高绒山羊舍饲效益的几点措施[J];河北畜牧兽医;2005年04期
8 丛玉艳;张建勋;;硫营养对绒山羊的影响[J];中国饲料;2007年06期
9 ;选购绒山羊三关键[J];农民致富之友;2007年11期
10 ;饲养绒山羊前景广阔[J];林业实用技术;2008年08期
11 马宁;;中国绒山羊发展的阶段性特征、现状及对今后发展的思考[J];吉林农业大学学报;2008年04期
12 刘胜华;;矿物质、微量元素对绒山羊的影响[J];现代畜牧兽医;2008年10期
13 采复拉·大木拉;朱马哈德尔;郑文新;陶卫东;沙热木·艾拜都拉;叶尔兰;;绒山羊科学抓绒技术和应用[J];畜牧兽医科技信息;2010年06期
14 王新侠;;如何进行绒山羊的选购和选配[J];农村养殖技术;2012年11期
15 赵凤立;何永涛;杨德俊;孙聚新;;绒山羊梳绒方法[J];辽宁畜牧兽医;1983年02期
16 张永和;大力开发绒山羊 促进牧区经济发展[J];新疆畜牧业;1990年02期
17 李冰;;多绒山羊[J];农业知识;2002年02期
18 叶成红,王生祥;青海绒山羊血清维生素A含量测定[J];甘肃畜牧兽医;2000年04期
19 刘启发,多杰仁增,克布生,李楼太,张延林,祁世荣,方有军;都兰县柴达木绒山羊新品种培育初报[J];辽宁畜牧兽医;2000年06期
20 贾志海,富俊才,侯文娟;河北绒山羊在黄淮海地区适应性研究[J];内蒙古畜牧科学;2000年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 陈宁;;绒山羊养殖户如何应对金融危机[A];《2009中国羊业进展》论文集[C];2009年
2 白文林;罗光彬;尹荣焕;姜午旗;张宝路;张守纯;赵志辉;;中国绒山羊品种的起源及遗传分化研究[A];第十二次全国畜禽遗传标记研讨会论文集[C];2010年
3 姜向宏;丁庆庆;;鄂托克旗绒山羊良种繁育体系建设与思考[A];《2011中国羊业进展》论文集[C];2011年
4 马宁;;中国绒山羊发展的阶段性特征、现状及对今后发展的思考[A];《2008中国羊业进展》论文集[C];2008年
5 孟瑞强;张燕军;王瑞军;王志新;张文广;王鹏宇;刘慧;王志英;白堃;周娟娟;李金泉;;绒山羊育种信息管理系统的设计与实现[A];中国畜牧兽医学会养羊学分会2012年全国养羊生产与学术研讨会议论文集[C];2012年
6 丁家刚;丁巍;;构建生态型绒山羊生产模式的思考与实践[A];《2009中国羊业进展》论文集[C];2009年
7 韩敏;张金合;马茂荣;苏秀玲;何俊琴;王宇;;放牧与圈养绒山羊血液生理生化指标比较分析[A];中国畜牧兽医学会家畜内科学分会2009年学术研讨会论文集[C];2009年
8 刘斌;李玉荣;王峰;;中国主要绒山羊品种资源及其研究与利用现状[A];中国畜牧兽医学会养羊学分会全国养羊生产与学术研讨会议论文集[C];2010年
9 刘兴亮;高爱琴;张文广;李金泉;王志新;张永斌;;转化生长因子受体Ⅱ在绒山羊皮肤中的表达[A];中国畜牧兽医学会养羊学分会全国养羊生产与学术研讨会议论文集[C];2010年
10 薛树媛;金海;李华伟;李长青;;不同物候期对放牧绒山羊食性与采食量的影响[A];中国畜牧兽医学会养羊学分会全国养羊生产与学术研讨会议论文集[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张微;绒山羊微量元素铜需要量的研究[D];中国农业大学;2004年
2 刘斌;绒山羊绒毛生长相关基因的筛选、鉴定和多态性分析[D];内蒙古农业大学;2012年
3 狄冉;中国产绒山羊微卫星和单核苷酸多态性研究[D];中国农业科学院;2008年
4 白文林;中国产绒山羊品种父系与母系起源的分子特征及遗传分化[D];吉林大学;2009年
5 孙泽威;松嫩羊草草地放牧绒山羊营养限制因素的研究[D];东北师范大学;2008年
6 郭旭东;绒山羊转胰岛素样生长因子Ⅰ基因体细胞核移植胚胎的制备[D];内蒙古大学;2008年
7 袁建龙;利用体细胞核移植技术生产转基因绒山羊的研究[D];内蒙古大学;2013年
8 许腾;绒山羊皮肤绒毛生长期与静息期基因差异表达的研究[D];内蒙古大学;2013年
9 赵胜军;不同氨基酸模式对绒山羊皮肤氨基酸利用的影响及机理[D];内蒙古农业大学;2004年
10 常子丽;持续埋植褪黑素对绒山羊绒毛生长特性和相关基因影响的研究[D];内蒙古农业大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 郭俊清;亮氨酸及β-羟基-β-甲基丁酸钙对绒山羊免疫机能和生产性能影响的研究[D];内蒙古农业大学;2009年
2 蒙成志;舍饲与放牧条件对绒山羊免疫功能和抗氧化功能的影响[D];内蒙古农业大学;2008年
3 赵苗;绒山羊6个候选基因遗传变异及其与经济性状关系研究[D];西北农林科技大学;2008年
4 宋洁;辽宁新品系绒山羊毛囊生长、发育相关基因的研究[D];辽宁师范大学;2008年
5 侯越;绒山羊联会复合体蛋白3基因的克隆、转录表达及多克隆抗体的制备[D];内蒙古大学;2009年
6 张建军;陇东绒山羊微卫星多态性与经济性状相关性研究[D];甘肃农业大学;2009年
7 张小芳;辽宁高产系绒山羊5条染色体上的微卫星位点分析[D];辽宁师范大学;2009年
8 金永;毛囊细胞特异表达胸腺素β4基因转基因绒山羊研究[D];内蒙古大学;2011年
9 庄玉;绒山羊肥大细胞的组织化学分析[D];内蒙古农业大学;2011年
10 王敏;绒山羊11号染色体遗传连锁图谱的构建[D];内蒙古农业大学;2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 驻站记者 闫洪君 通讯员 石景君;阿旗绒山羊产业成为农牧民增收的重要来源[N];赤峰日报;2006年
2 高学海;扎旗推广绒山羊改良提质项目人均增收880元[N];通辽日报;2007年
3 本报记者 董亮;上肥地乡:绒山羊身上梳下“软黄金”[N];铁岭日报;2006年
4 党耀翔;岢岚倾力打造“中国绒山羊之乡”[N];忻州日报;2007年
5 钟改清;养绒山羊带富山区牧民[N];伊犁日报(汉);2007年
6 许金亭李占崇;推广普及绒山羊饲养 清河力保羊绒霸主地位[N];中国畜牧兽医报;2008年
7 王昆;达旗绒山羊提质又增效[N];鄂尔多斯日报;2008年
8 孙国权;阿旗举行首届绒山羊评比交易大会[N];赤峰日报;2008年
9 驻站记者 李云飞通讯员 石景君;阿旗绒山羊肉用成为产业增效的新亮点[N];赤峰日报;2008年
10 通讯员 鲁红光 张黎;尉犁绒山羊改良助农增收[N];巴音郭楞日报;2008年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978