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Research on Rian gene expression regulations in mouse preimplantation embryos

【摘要】:正Mammalian genome is transcribed into long and short non-coding RNAs(ncRNAs) in a developmentally regulated pattern.Long ncRNA(lncRNA) was defined as more than 200nt ncRNA,although the molecular functions of lncRNAs remained unclear.Evidence implicates that lncRNAs regulate the gene expression through the modification of chromatin,transport of specific mRNAs,control of pre-mRNA splicing and maintenance of subnuclear structures.LncRNA Rian gene(NR_028261) was identified as a maternal expressed imprinting gene located in Dlkl-Dio3 region of mouse distal chromosome 12,which contained three of transcripts Meg8,Irm and AB063319,but their transcriptional characteristics and roles remains unknown in preimplantation embryos.The preimplantation embryos at oocyte,2-,4-,8- cell,morula and blastula stages were collected.The expression profiles of Rian and the other imprinting genes at Dlk1-Dio3 were analyze by using quantitative real-time RT-PCR(qRT-PCR).The results showed that Meg8,Irm,AB063319,Gtl2,Mirg and Dio3 expressions ascended from morula except for Dlk1,and up-regulated more than two times at blastocyst.The expression of Irm was obviously higher than Meg8 and AB063319.The fluorescence in situ hybridization(FISH) results indicated that Irm signals were detected both in inner cell mass and trophoblast cells of blastula.Furthermore,we analyzed the imprinted pattern of Rian at preimplantation stages.The results suggested that IG-DMR at Dlk1-Dio3 imprinting control region already maintained differentially methylated at 8-cell stage,but Gtl2-DMR was still unmethylated. Conclusions:Our data indicate that Irm could be regarded as main transcript of Rian and functional at preimplantation stages.The imprinted pattern of the Dlk1-Dio3 region was established by IG-DMR.

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