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DNA克隆修饰新技术研究及其应用

王海龙  张友明  张允雷  黄璠  唐滢  单世平  吴风  颜富  贾亮  丁学知  胡胜标  夏立秋  
【摘要】:目前主要的DNA克隆和修饰技术包括体外进化(DNA shuffling),位点特异性重组和Red/ET同源重组等。这些DNA克隆和修饰技术被广泛应用于功能基因组学和代谢工程研究。位点特异性重组和Red/ET同源重组尤其适用于大分子DNA的克隆和修饰。近几年来,本实验室利用体外进化对苏云金芽胞杆菌Cry1AC的结构和功能的关系进行了研究。位点特异性重组系统Cre-1oxP和Red/ET同源重组技术在本实验室被广泛的用于苏云金芽胞杆菌杀虫基因组及其晶体蛋白作用机理研究、放线菌次级代谢产物生物合成基因簇的克隆和功能研究、沉默功能基因簇的挖掘以及抗肿瘤药物的筛选。新的同源重组和反向筛选技术被用于对功能基因进行精确修饰且不留下任何额外的序列,如点突变和基因簇模块替换等。本实验室利用新的同源重组和反向筛选技术对重要次级代谢产物生物合成基因簇模块进行了替换,研究这些模块在次级代谢产物合成中的作用。这些DNA克隆和修饰新技术促进了功能基因组学和代谢工程的研究。

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