收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

重组人COX-2蛋白的原核表达、纯化及鉴定

王文涵  王媚娘  武艳  徐洪亮  李兵直  王天时  李桂英  
【摘要】:COX-2(Cyclooxygenase-2)是催化花生四烯酸转化为前列腺素类物质的限速酶。在生长因子、细胞因子、炎症介质、促癌剂等刺激下,细胞受诱导而大量表达COX-2。COX-2基因已经被证实是一种癌基因,在多种肿瘤细胞和组织中,都存在着过度诱导表达和异常活化,是肿瘤治疗中一个重要的靶点。本研究将人COX-2基因部分cDNA克隆入原核表达载体pET28b(+)中,并进行酶切鉴定和测序分析。将鉴定正确的重组质粒转化E.coli BL21(DE3)后获得表达菌株。该表达菌株经IPTG诱导后,高效表达出带有组氨酸标签的以包涵体形式存在的融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的38.7%。包涵体经过洗涤、尿素变性溶解、His Trap HP Kit柱纯化、稀释复性,获得纯度达98%以上的重组人COX-2蛋白。ELISA、SDS-PAGE及Western-blot分析表明,该重组蛋白能够特异性与抗COX-2抗体结合。酶学分析结果显示,该重组人COX-2蛋白具有较好的过氧化物酶活性。结果表明,已成功表达和纯化纯度达98%的重组人COX-2蛋白,该蛋白具有与抗COX-2抗体结合的活性和较好酶活性。该结果为深入研究COX-2在肿瘤发生、发展中的作用及以COX-2为分子靶点的抗癌药物的筛选奠定了基础。

知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 陈丽艳,胡双九;COX-2与VEGF的表达及相关性研究进展[J];中国优生与遗传杂志;2005年06期
2 于新蕊,滑莉莎,计惠民;COX-2抑制剂损害肾功能[J];国外医学.药学分册;2001年01期
3 常丽;环氧化酶-2与缺氧缺血性脑损伤[J];国外医学.儿科学分册;2002年06期
4 陆志城;有关特异性COX-2抑制剂的哲学思考[J];医学与哲学;2002年11期
5 李勇,曾甫清;COX-2—膀胱癌治疗的新靶点[J];湘南学院学报(自然科学版);2004年03期
6 龚萍,黄光英;环氧化酶在胚泡着床中的作用[J];生殖与避孕;2004年06期
7 朱风尚 ,陈锡美;对环氧合酶与非甾体抗炎药的新认识[J];世界临床药物;2003年10期
8 凌家俭,管晓翔,陈琪,范乐明,韩晓;1型糖尿病防治新方法:构建COX-2siRNA表达载体阻断COX-2基因表达[J];中国临床康复;2004年06期
9 陈江,谢勇,周小江,吕农华,黄德强,徐萍,王崇文;COX-2和iNOS在大肠腺癌中的表达及意义(英文)[J];中国现代医学杂志;2004年03期
10 王西京,代志军,刘小旭,康华峰,赵世平,薛锋杰;乳腺癌中COX-2、HER-2的表达及其相关性[J];西安交通大学学报(医学版);2004年02期
11 何绥平,张威,毛璐,甄健存;选择性环氧化酶-2抑制剂的研究与安全性[J];药物不良反应杂志;2004年02期
12 ;COX-2同大肠癌肝转移有关[J];中国肿瘤;2000年07期
13 王海霞,陈其奎;环氧合酶-2在胰腺癌组织中的表达及其意义[J];癌症;2003年06期
14 王顺文;COX-2与NF-κB在食管癌组织中的表达及关系[J];胃肠病学和肝病学杂志;2004年06期
15 杨景勋;万络事件及COX-2抑制剂心血管安全性的最新评估[J];药物不良反应杂志;2005年02期
16 李改丽,王百忍,费玲玲,张萍,杨浩,鞠躬;COX-2的基因克隆和多克隆抗体制备[J];生物化学与生物物理进展;2003年03期
17 张罗献,僧靖静,赵高峰,高冬玲,李玉光;肺腺癌组织中COX-2 mRNA的表达[J];郑州大学学报(医学版);2004年04期
18 李必海;COX-2抑制剂治疗癌症和阿尔茨海默病[J];国外医学.药学分册;1999年06期
19 梅之南,施震,汪细和,罗顺德;COX-2抑制剂Celecoxib的合成[J];中国医药工业杂志;2000年10期
20 张可,邓长生,朱尤庆,杨院平,张燕敏;溃疡性结肠炎组织中NF-κB,COX-2和iNOS表达的意义[J];世界华人消化杂志;2002年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 辛英豪;高继明;刘标;李莎莎;姜世金;;Ⅰ型鸭病毒性肝炎VP1基因的克隆与原核表达[A];山东畜牧兽医学会禽病学专业委员会第一次学术研讨会论文集[C];2009年
2 焦石;贾立军;薛书江;刘明明;黄国明;张守发;;牛源犬新孢子虫MAG1基因的克隆及原核表达[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会论文集[C];2011年
3 彭跃跃;丁燏;简纪常;鲁义善;;南极衣藻γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(GSHI)基因的克隆,原核表达及定量分析[A];渔业科技创新与发展方式转变——2011年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
4 岳亮;王艺磊;张子平;林鹏;邹志华;谢芳靖;陈锦民;冯建军;;日本囊对虾Cathepsin B基因的克隆与原核表达[A];中国甲壳动物学会第十一届年会暨学术研讨会论文摘要集[C];2011年
5 孟先明;潘艳;蔡新斌;陆专灵;梁湘;唐海波;杨剑;张红普;罗廷荣;;狂犬病毒ERA株基质蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备[A];2010全国狂犬病防控高层论坛论文集[C];2010年
6 赵刚;李刚;范晓娟;;狂犬病病毒P基因的原核表达及间接ELISA方法的应用[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会论文集[C];2010年
7 李凯;高宏雷;祁小乐;高玉龙;高立;邓小芸;王笑梅;;禽网状内皮组织增生病病毒env基因的原核表达及其多克隆抗体制备[A];全球肉鸡产业论坛暨第二届中国白羽肉鸡产业发展大会会刊[C];2010年
8 宋艳;柳学广;朱晓苏;徐丽;司马杨虎;徐世清;;野桑蚕Bmand-Sxl基因的克隆及原核表达[A];中国蚕学会第六届青年学术研讨会论文集(1)[C];2009年
9 袁媛;周新;;HBG1和TFRC基因的克隆与原核表达[A];中华医学会第八次全国检验医学学术会议暨中华医学会检验分会成立30周年庆典大会资料汇编[C];2009年
10 刘冠楠;姜建国;;盐生杜氏藻3-磷酸甘油脱氢酶基因的原核表达及酶学性质分析[A];2010年中国农业工程学会农产品加工及贮藏工程分会学术年会暨华南地区农产品加工产学研研讨会论文摘要集[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 陈立志;牛源致病性坏死梭杆菌分离鉴定及其白细胞毒素免疫特性研究[D];吉林大学;2008年
2 赵宇军;猪戊型肝炎病毒结构蛋白基因表达及其基因特异性噬菌体展示肽库构建[D];中国农业科学院;2005年
3 韩俊友;牛蛙皮肤抗菌肽分离纯化、基因克隆表达及生物学特性的研究[D];吉林大学;2007年
4 李静;海洋酵母菌Metschnikowia reukaufii W6b酸性蛋白酶的生产、基因克隆和表达的研究[D];中国海洋大学;2008年
5 游向荣;龙眼成花转变与成花逆转的差异蛋白质组学研究[D];福建农林大学;2009年
6 许波;抗菌/抗内毒素多肽葛佬素的表达、纯化及其生物活性的初步研究[D];第四军医大学;2004年
7 孙照刚;传染性喉气管炎病毒糖蛋白G基因的克隆、表达、蛋白功能研究以及缺失该基因病毒的重组[D];中国农业大学;2005年
8 郑银英;苹果茎沟病毒和褪绿叶斑病毒分子变异研究[D];华中农业大学;2005年
9 姜秀云;牛分枝杆菌主要保护性抗原基因的克隆、表达及免疫研究[D];吉林农业大学;2005年
10 黄小波;猪传染性胃肠炎检测基因芯片与猪传染性胃肠炎病毒SC-H株N基因表达研究[D];四川农业大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 陈雄艳;人IL-24基因的克隆、表达及活性鉴定[D];苏州大学;2004年
2 赵艳丽;水稻中DNA甲基转移酶的原核表达及功能初步鉴定[D];东北师范大学;2010年
3 丁彪;小鼠IFRG15基因在植入前胚胎及原核表达的研究[D];安徽农业大学;2010年
4 牟静;多头带绦虫四川株六钩蚴Tm45W基因的克隆与原核表达[D];四川农业大学;2010年
5 刘志强;抗Cyclin D1人源胞内单链抗体的原核表达与鉴定[D];吉林大学;2011年
6 王轶;甘蓝型油菜“蜀杂九号”防御素基因全长cDNA的克隆与原核表达[D];四川大学;2005年
7 张淑华;心肌型脂肪酸结合蛋白的原核表达与应用研究[D];吉林大学;2006年
8 王云珑;拟南芥Athspr突变体的耐热性分析及Athspr基因的原核表达[D];兰州大学;2010年
9 李会娟;家蚕转胶蛋白基因的原核表达及功能的初步研究[D];浙江理工大学;2010年
10 欧阳锦凤;人博卡病毒结构蛋白VP1u,非结构蛋白ORFx和NP1的原核表达与抗体制备[D];华中师范大学;2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 吴一福;我学者首次发现抗HBV末端蛋白杂交瘤细胞系[N];中国医药报;2006年
2 宋冬 何玉玺;祖国的需要,就是我们最好的选择[N];科技日报;2009年
3 本报记者 伊洁 张颖;“挑战杯”的胜利者[N];福建日报;2005年
4 张晓鹏 何秀丽;哈兽研构建起“猪蓝耳病”预防控制平台[N];中国畜牧兽医报;2008年
5 记者 张颖 伊洁;农林大学学生喜获“挑战杯”特等奖[N];福建日报;2005年
6 张国民;还大家一个明白[N];中国医药报;2003年
7 李天书;刘云涛;新生病毒敲响警钟[N];中国医药报;2004年
8 俞忠良;我国克隆出SARS病毒样颗粒[N];健康报;2003年
9 王彩娟;葛兰素史克公布目前药物研发状况[N];中国医药报;2004年
10 本报首席记者 任荃;一石三鸟“里葆多”[N];文汇报;2009年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978