红麻叶片蛋白提取及其蛋白质组双向电泳体系的建立与优化

【摘要】：目的为了建立一种比较适合红麻叶片蛋白质的提取方法及其蛋白质组双向电泳体系。方法分别采用了TCA-丙酮法、尿素-硫脲法、酚抽提法提取红麻叶片蛋白质,在蛋白质提取效率、单向和双向电泳图谱等方面比较了这三种方法的提取效果,并从IPG(immobilized pH gradient)胶条pH范围选择、上样方式、上样量、分离胶浓度等层面上优化了双向电泳技术。结果用酚抽提法提取的蛋白质纯度可达25.5%,在单向和双向电泳图谱中分别获得了26条蛋白质条带和1436个蛋白质点。红麻叶片蛋白质点主要分布在pH4～7范围内。结论酚抽提法比较适合红麻叶片蛋白质的提取。采用主动水化上样,pH4～7的24cmIPG胶条,上样量为1.4mg,12%的分离胶来分离可得到蛋白质点清晰,分布均匀,背景清楚的理想双向电泳凝胶图谱。