胆固醇缺失小鼠胚胎纤维细胞中胆固醇含量对窖蛋白家族成员含量的不同影响

【摘要】：目的利用胆固醇缺失细胞模型研究胆固醇对细胞窖蛋白家族成员窖蛋白-1和窖蛋白-2表达的影响。方法由野生型(WT)及24-脱氢胆固醇还原酶(DHCR24)基因敲除(KO)小鼠的胚胎鼠分离培养小鼠胚胎纤维细胞(Mouse Embryonic fibroblasts, MEFs),并将利用无血清的培养基替代含血清的生长培养基以建立内源性胆固醇缺失模型。胆固醇氧化酶法用来判定胆固醇在培养基替代前后的含量变化。利用Western Blot及Northern blot方法分别考察细胞窖蛋白-1和窖蛋白-2在蛋白水平及mRNA水平表达受胆固醇含量变化的影响。细胞双重免疫荧光染色方法用于分析细胞窖在胆固醇去除后的结构变化及窖蛋白受胆固醇影响的调控机制。结果在无血清培养基替代引起了DHCR24 KO MEFs细胞内胆固醇含量的降低,而野生型MEFs内的胆固醇含量无明显变化。与对照组野生型MEFs相比,无血清培养基替代在DHCR24 KO MEFs引起的胆固醇的去除并未引起窖蛋白-1蛋白及uRNA水平的变化,相反窖蛋白-2的mRNA水平随着胆固醇含量的下降而降低。进一步的细胞双重免疫荧光染色结果显示DHCR24KO MEFs内胆固醇的去除破坏了细胞窖的结构及胰岛素受体在细胞窖中的定位,暗示胰岛素信号通路的受损可能贡献于eaveolin-2表达的降低。结论本研究首次证明了窖蛋白-2受细胞内胆固醇含量的调控,且其调控机制可能与胰岛素信号通路的受损有关。