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PCR/LDR结合纳米金新型通用型芯片技术在低丰度DNA点突变检测中的可行性研究

易萍  李力  俞丽丽  郭建新  郑英如  周元国  陈竹钦  
【摘要】:目的探讨PCR/LDR/纳米金新型通用型芯片技术应用于低丰度DNA如孕妇血浆中的胎儿DNA或肿瘤患者血浆DNA中的点突变检测的可行性。方法首先利用PCR技术扩增靶序列,以扩增产物为模板,用LDR技术特异地识别突变,其中在LDR的上游引物的5'端连上标签(tag)序列,下游引物的3'端用生物素标记,然后将5'端有tag序列和3'端有生物素标记的连接产物与通用型芯片上的anti-tag序列(与tag互补的序列)进行杂交,接着用链霉亲和素修饰的纳米金作为第二反应物,与在芯片上杂交的连接产物以生物素-链霉亲和素反应的方式相结合,经银显影液放大后用普通CCD观察结果。以β珠蛋白基因IVS-Ⅱ-654(C→T)突变为研究对象,检测该技术的灵敏度。结果PCR/LDR结合纳米金新型通用型芯片技术的灵敏度检测及母体血浆DNA实验模型的检测结果表明,该技术用于低丰度基因突变检测的灵敏度可达到1:1000。结论PCR/LDR结合纳米金通用型芯片技术的灵敏度可以满足于低丰度DNA如孕妇血浆中的胎儿DNA或肿瘤患者血浆DNA中的点突变/ SNP检测,可大幅度提高标本的检测通量。同时此方法快速简便,不需特殊的仪器设备,可适于普通实验室开展,在无创性产前诊断中具有较好的应用前景。

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