成骨细胞特异性表达Cre重组酶转基因小鼠的建立

【摘要】：构建了含有骨钙素基因启动子、Cre 重组酶基因和人生长激素基因 polyA 的转基因载体 pOC—Cre,以显微注射的方法将4.6 kb 的转基因片段 OC-Cre 导入小鼠受精卵。16只子代小鼠中经 PCR 和 Southern 杂交鉴定,有2只小鼠携带外源基因,整合率为12.5%。为了检测 OC—Cre 在转基因小鼠中表达的组织特异性,将转基因首建者小鼠与基因组上携带有 LoxP 位点的条件性 Smad4基因敲除小鼠交配,PCR 结果显示,仅在子代纯合型小鼠骨组织基因组中扩增出了 Cre 介导重组后的片段。将 OC—Cre 转基因小鼠与 ROSA26报告小鼠交配,利用 LacZ 染色对双转基因阳性子代小鼠进行检测,结果显示 Cre 重组酶在成骨细胞中特异性表达并介导 ROSA 基因座 LoxP 位点间的重组。所有这些结果说明:所建立的 OC—Cre 转基因小鼠在成骨细胞中特异性表达 Cre 重组酶,并能在体内介导成骨细胞基因组上 LoxP 位点间的重组,是一种理想的研制成骨细胞特异性基因敲除小鼠的工具小鼠。