一个新的烟草糖基转移酶的初步研究

【摘要】：糖基转移酶(glycosyltransferase,GT)广泛存在于生物界,能催化糖基从激活的供体转移到特定的受体分子上。GT 在调节植物激素水平、抵御外来有害生物侵害或化合物毒害以及调节体内化合物代谢等方面有重要作用。本实验室以烟草为材料,克隆了一个受水杨酸(SA) 和甲基茉莉酸(MJA)诱导表达的新的 GT 基因。在 NCBI 和 Prosite 数据库中进行保守结构域分析的结果显示这个酶具有糖基转移酶28家族的保守域和 UDP-GT 的保守域。经 TMPred 分析表明,在该酶蛋白的 N 端第100-150氨基酸处具有跨膜域。利用 CAZy 数据库中的 GT 序列与此 GT 序列构建系统发育树,在与 GT28家族的其它植物 GT 以及与烟草中其它 GT 比较后显示,这个糖基转移酶单独构成了一簇。以植物表达载体 pCAMBIA1305构建的受 CaMV 35S 启动子驱动的 GT 基因的超表达载体转化烟草,利用荧光定量 PCR 检测转化植株的结果表明目的基因的表达量较对照提高5-23倍不等,超表达 GT 基因的转化植株在苗期有不同程度表型变异,叶片脉络走向、叶表触摸手感均与正常植株明显不同。以植物表达载体 pCANMBIA 构建了受 CaMV 35S 启动子驱动的 GT 基因与绿色荧光蛋白(GFP)基因的融合蛋白表达载体,转化苗中含 GFP 的融合蛋白主要定位于根尖细胞的质膜上。