苏云金芽胞杆菌中杀线虫晶体蛋白基因cry6A的负表达调控

【摘要】：苏云金芽胞杆菌YBT-1518能产生米粒状伴胞晶体蛋白,该晶体蛋白包含 54kDa和45kDa两种蛋白,其对北方根结线虫(Meloidogyne hapla)毒力为7．55 μg／mL。从该菌株中克隆到一个2941bp的片断。序列分析表明,该片断上游有一启动子,下游有两个ORF(orf1和orf2),在它们之间有一个可形成茎环结构的反向重复序列。Blast分析发现,orf1与已经报道的cry6Aa1有98％同源性, 该序列已经在Getabank上登陆,其登陆号为AF499736,命名为cry6Aa2。未发现有与orf2有明显同源性的序列。将该序列克隆到E.coli-Bt穿梭载体pHT304 上,并转入无晶体突变株BMB171中,发现orf1表达一个54kDa的蛋白,也可形成米粒状伴胞晶体,对北方根结线虫的毒力为7．43 μ g／mL。SDS-PAGE未能检测到orf2的表达产物,但orf2能在orf1上游启动子的启动下单独表达或与orf1 共表达,其表达产物对线虫无毒力,也不能帮助提高orf1表达产物的毒力。通过RT-PCR能在YBT-1518中检测到orf2的转录产物。当将orf2插入突变后,orf1 的表达量提高了80％。所有实验结果表明,克隆的该序列为一个完整的操纵子, 其中反向重复序列为一顺式作用因子,抑制orf2的表达,导致其低水平表达。 Orf2为一反式作用因子,其微量表达产物反向调节orf1的表达。