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心脏和软骨组织特异性表达Cre重组酶转基因小鼠的基因型鉴定

侯宁  王剑  李文龙  张继帅  杨晓  
【摘要】:随着功能基因组研究的发展,组织特异性条件基因打靶的应用会越来越广泛。研制多种组织特异性Cre重组酶转基因小鼠是研制不同组织特异性基因剔除小鼠的基础。近年来,我们实验室已成功研制出胰腺、软骨组织、肝脏、角质细胞及成骨细胞等10余种组织特异性Cre重组酶转基因小鼠。目前,所有Cre转基因小鼠的基因型鉴定均使用位于Cre基因编码区上的通用引物Crel和Cre2进行PCR鉴定,无法区分不同组织特异性的Cre转基因小鼠。为了特异性鉴定心脏和软骨组织特异性Cre重组酶转基因小鼠,我们重新设计了针对α-MHC-Cre和Col2A1-Cre转基因小鼠的特异性引物。鉴定α-MHC-Cre转基因小鼠的上游引物MHC1位于α-MHC启动子上的第2内含子上,下游引物MHC2位于Cre基因编码区上。序列为MHC1:5’-ATGACAGACAGATCCCTCCTATCTCC-3’,MHC2:5’-CTCATCACTCGTTGCATCA TCGAC-3’,通过PCR可扩增出200 bp的条带。Col2A1-Cre转基因小鼠的上游引物位于Col2启动子上,下游引物位于Cre基因编码区上。序列为Col2A1-1:5’-GAGGGTCCAGCCCGAGCTACTT-3’,Col2A1-2:5-GCATCGACCGGTAATGCAGGC-3’,可扩增出300 bp的条带。PCR扩增条件均为:预变性94℃3min;30个循环:94℃变性30s,60℃退火30s,72℃延伸40s;72℃延伸10min,4℃保温。结果显示用MHC1、MHC2引物进行PCR检测,只有从α-MHC-Cre转基因小鼠基因组DNA模板中能够扩增出200 bp的条带,而其它多种Cre转基因小鼠不能扩增出该条带。用Col2A1-1、Col2A1-2引物进行检测,只有从Col2A1-Cre转基因小鼠基因组DNA模板中能够扩增出300 bp的条带,而其它多种Cre转基因小鼠不能扩增出该条带。结果证实我们设计的这2对引物可分别用于心脏和软骨组织特异性表达Cre重组酶转基因小鼠的基因型鉴定。

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