纤毛虫酸性核糖体蛋白的磷酸化分析

【摘要】：酸性核糖体蛋白(真核生物中为P0、Pl和P2)位于核糖体的活性部位,维持着核糖体的稳定性和活性,同时通过与延伸因子相互作用参与蛋白合成的调节,而且酸性核糖体蛋白还与肿瘤的发生、发展、细胞凋亡以及许多疾病有关。本研究从单细胞真核生物嗜热四膜虫(Tetrahymena thermophilia)和八肋游仆虫(Euplotes octocarinatus)中克隆了5种酸性核糖体蛋白基因,对其基因序列以及拟编码的氨基酸序列进行了分析。结果表明,纤毛虫P0与其他生物的P0序列相似性为48-54%。纤毛虫P2与其他生物的P2序列相似性在50%-65%之间。序列比对发现纤毛虫酸性核糖体蛋白的C端序列与其他生物的相应区域序列有很大不同。将人和八肋游仆虫的P2在大肠杆菌中进行表达纯化,获得电泳纯蛋白。利用酪氨酸激酶(CKII)对蛋白进行处理,通过电泳行为和质谱对P2蛋白的磷酸化位点进行了研究。为进一步探讨酸性核糖体蛋白C末端在蛋白质翻译过程中的调控作用,以及真核生物酸性核糖体蛋白磷酸化对核糖体功能的影响奠定了基础。