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HBx通过上调miR-21抑制了PDCD4的表达

仇雪梅  乔凤昌  宋蕴薇  劳英斌  樊红  
【摘要】:肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是我国发病率和死亡率均高的重大疚病。慢性乙肝病毒((Hepatitis B virus,HBV)的感染为我国肝癌的主要病因。有证据表明HBV的X蛋白(HBx)在HCC的发病机理中起到了关键性的作用。抑癌基因Programmed cell death 4(PDCD4)在肝组织细胞中不仅参与TGF-β1介导的凋亡,并且抑制肝癌细胞的转移。肝癌组织及肝癌细胞系中PDCD4的表达模式及其可能的调控机制尚不清楚。本研究应用Western blot,免疫组织化学和实时荧光定量RT-PCR方法分析肝癌病例组织中PDCD4的表达模式,发现在53%的病例中表现为PDCD4的低表达趋势。分析PDCD4与HBV关键基因HBx的表达之间关系发现,PDCD4的表达水平与HBx的表达水平呈一定的负相关。为了探讨HBx对PDCD4表达存在的可能调控机制,本研究以HBx表达载体转染肝细胞系及肝癌细胞系,发现HBx的表达下调了PDCD4的表达,且在蛋白水平更为明显。HBx表达同时诱导了DNA甲基转移酶DNMTl,DNMT3B的表达。进一步MSP分析未发现HBx对PDCD4启动子甲基化状态的改变。结合已有报道,发现一些miRNA能够抑制PDCD4的表达,PDCD4为miR-2l的下游靶基因。qPCR方法研究发现HBx上调了miR-2l的表达,应用RNAi方法抑制HBx的表达,结果显示HBx的表达抑制使PDCD4的表达上调,并诱导了细胞凋亡。本研究发现,HBx对PDCD4的表达抑制并不涉及其启动子区甲基化,而是通过上调miR-21的表达靶向抑制了PDCD4的表达。

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