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单宁酸对大鼠皮肤创面愈合的影响及其作用机制研究

陈亚琴  殷中琼  
【摘要】:[目的]探讨单宁酸体内外促大鼠皮肤机械性损伤的愈合作用及其作用机制,为其应用于宠物皮肤创伤提供理论依据。[方法]采用无菌活检穿孔器制备大鼠皮肤创伤模型,分别于伤口处涂抹生理盐水、云南白药和高、中、低剂量的单宁酸,测定不同时间点伤口的愈合率;通过ELISA和RT-PCR测定炎症因子和生长因子的表达;利用Western Blot分析单宁酸对创面组织中MAPKS/Erk 1/2信号通路的影响;利用LPS刺激RAW264.7细胞模拟创伤炎症反应,经不同浓度单宁酸处理后,差速离心法提取细胞外泌体并鉴定,通过ELISA和RT-PCR测定细胞因子和外泌体的表达量;通过CCK-8和划痕试验分别测定单宁酸和外泌体对NIH 3T3细胞增殖率和迁移率的影响,并利用Western Blot分析单宁酸对细胞NF-κB/MAPKs信号通路的影响。[结果]①不同浓度的单宁酸均能显著地促进大鼠伤口愈合和毛囊再生;②低中剂量组的单宁酸能显著提高血清中bFGF的表达,并下调IL-1β和IL-6的表达;③高中剂量组组织中bFGF、Erk1/2和p-Erk1/2蛋白的表达量显著提高;④单宁酸处理经LPS刺激的RAW264.7细胞后,IL-1β、TNF-α和IL-6的表达量与LPS组相比均显著下调,bFGF的表达量显著升高;⑤外泌体特异性蛋白TSG101和CD81的表达量在0.06 nM单宁酸组中显著上升,且TSAP6基因在转录水平上显著升高;⑥0.12 nM和0.06 nM的单宁酸能显著地促进NIH 3T3细胞增殖,对细胞的迁移率无显著性影响;单宁酸诱导的巨噬细胞外泌体能极显著地促进细胞迁移(P0.001);⑦0.06 nM单宁酸能显著下调p-IκB、p-P65和p-JNK的表达,上调p-Erk 1/2的表达。[结论]单宁酸对大鼠创面愈合具有良好的促进作用,其作用机制为:①刺激bFGF的分泌,激活Erk 1/2信号通路,促进细胞增殖,达到促愈合的效果;②抑制NF-κB通路的激活来缓解创伤的炎症反应,并刺激巨噬细胞分泌外泌体,诱导纤维细胞的迁移和聚集,从而促进创面组织的再生。

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