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CRISPR/CAS9介导的布鲁氏菌基因敲除质粒的构建

张广冻  支飞杰  相彩霞  王爱华  
【摘要】:正目的:构建病原基因缺失株是研究相关基因功能、研发新疫苗等的有效手段。试验以pBBR1MCS-5为骨架载体构建能够适用于布鲁氏菌的CRISPR/CAS9介导的基因敲除质粒,为获得布鲁氏菌基因缺失株提供技术和材料。方法:以能够在布鲁氏菌内复制的广宿主克隆载体pBBR1MCS-5为骨架载体,在其NsiⅠ和XbaⅠ酶切位点间插入庆大霉素抗性基因的启动子序列(GmR promoter),在布鲁氏菌内表达Cas9核酸内切酶;在XbaⅠ和SacⅠ酶切位点

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