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蛋氨酸和叶酸对LPS刺激的肉鸡PBMC促炎性细胞因子表达的影响

申静  武圣儒  郭伟  李世召  姚军虎  杨小军  
【摘要】:炎性细胞因子的表达受表观遗传修饰的调控,蛋氨酸和叶酸可作为甲基供体影响表观遗传修饰的DNA甲基化。本试验利用脂多糖(LPS)刺激肉鸡PBMC建立肉鸡炎症模型,旨在研究蛋氨酸(Met)和叶酸(FA)对LPS刺激的肉鸡PBMC促炎性细胞因子表达的影响,为后续通过表观遗传学调控肉鸡炎症反应提供依据。本试验以健康肉鸡的PBMC为研究对象,采用3×3双因素试验设计,试验因素为Met 3个浓度(7.5、15和30 mg/L,分别记为Low-Met,Medium-Met和High-Met)和FA 3个浓度(0.5、1和2 mg/L,分别记为Low-FA,Medium-FA和High-FA),培养48 h,LPS刺激时间为3 h,浓度为10μg/mL。正常培养基中Met浓度为15 mg/L;FA浓度为1 mg/L。利用MTT法检测细胞增殖活性;利用RT-qPCR方法检测DNA甲基转移酶与促炎性细胞因子的mRNA表达量;利用BSP方法检测IL-6和TNF-α的启动子区甲基化水平。结果显示,Met和FA对肉鸡PBMC增殖活性存在交互作用(P0.001),随着Met和FA浓度的提高,LPS刺激的肉鸡PBMC的增殖活性显著增强(P0.001)。Met和FA对肉鸡PBMC DNMTs的表达存在交互作用;与Medium-Met相比,Low-Met显著提高了DNMT1和DNMT3a的表达量,HighMet显著降低了DNMT3a的表达量;与Medium-FA相比,Low-FA显著提高了DNMT1,DNMT3a的表达量,且High-FA显著提高了DNMT1的表达量。与Low-Met相比,High-Met显著降低了IL-6的表达量(P0.05);Medium-Met显著降低了TNF-α的表达量(P0.05);FA对促炎性细胞因子表达无显著影响。High-Met组极显著提高IL-6-191 CpG位点甲基化水平(P0.001)。Medium-Met组显著提高TNF-α-419 CpG位点甲基化水平(P0.05)。结果表明,Met可通过影响IL-6和TNF-α基因特异位点的甲基化水平,进而影响其转录水平,缓解炎症反应。

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