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屎肠球菌对Caco-2细胞和RAW264.7细胞先天免疫应答的调节

黄怡  李雅丽  黄琴  余东游  崔志文  李卫芬  
【摘要】:(目的)利用体外细胞试验观察屎肠球菌对生理状态和大肠杆菌K88感染状态下的Caco-2细胞和RAW264.7细胞先天免疫应答的影响,为阐明屎肠球菌的益生作用机理提供科学基础。(材料方法)Caco-2细胞分别与PBS(pH 7.4)(CTC组)、屎肠球菌EF1(2×108CFU.mL-1,EFC组)、E.coli K88(2×108CFU.mL-1,ECC组)在37℃5%CO2的培养箱中共孵育2 h,或者经屎肠球菌EF1预处理1 h后的Caco-2细胞再与E.coli K88共孵育2 h(EF-ECC组);RAW264.7细胞分别与PBS(pH 7.4)(CTR组)、屎肠球菌EF1(2×108CFU.mL-1,EFR组)、E.coli K88(2×108CFU.mL-1,ECR组)在37℃5%CO2的培养箱中共孵育12h,或者经屎肠球菌EF1预处理1h后再与大肠杆菌K88共孵育12h(EF-ECR组)。验结束时用ELISA法分别检测细胞培养上清中的各项细胞因子以及PGE2和O2.-含量。(结果)与CTC组相比,EFC组的IL-10水平提高487.68%(P0.01),而ECC组检测不到IL-10,EF-ECC组则增加了586.05%(P0.01);EFC组的APRIL含量也比CTC组增加350.19%(P0.01),但显著低于ECC组(P0.01),EF-ECC组也比ECC组下降88.53%(P0.01)。与CTR组相比,EFR组的IL-10、TNF-α、IFNγ以及O2.-含量分别增加272.45%、963.46%、220.81%、92.95%(P0.01),并且还引起少量的IL-6分泌,但以上细胞因子的量都远低于ECR组(P0.01);而IL-1β、IL-8、IL-12和PGE2的含量都没有显著变化。与ECR组相比,EF-ECR组的IL-10、TNF-α、IFNγ、IL-1β、IL-8和PGE2的水平分别提高93.71%、221.91%、818.50%、402.63%、151.92%和238.36%(P0.01),而O2.-的含量则下降14.37%(P0.01)。(讨论)受细菌等抗原刺激的组织或细胞通过释放各种细胞因子和趋化因子来活化免疫,维持平衡状态[1]。生理状态下益生菌的诱导作用弱于致病菌,但在致病菌感染时则能增强免疫应答程度[2]。本次研究也得到相似的结果。结果提示,屎肠球菌EF1通过减轻Caco-2细胞促炎反应和增强RAW264.7细胞炎症应答来抵抗大肠杆菌K88的感染。同时还发现,屎肠球菌对APRIL和IL-10 2种细胞因子的产生均有调节作用,且与大肠杆菌K88的作用显著不同。(结论)可见,屎肠球菌EF1对Caco-2细胞和RAW264.7细胞有双向性免疫调节作用。

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