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日本血吸虫鞘脂激活蛋白原T细胞免疫原性研究

张艳丽  赵犇鹏  李莹  杨健美  苑纯秀  冯新港  
【摘要】:目的辐照致弱血吸虫尾蚴或童虫(RA)疫苗能够诱导宿主产生以Th1类CD4+T细胞介导的高保护性效应功能,本研究目标是鉴定日本血吸虫鞘脂激活蛋白原(SiPSAP)分子的免疫原性及其T细胞表位,为发现可能模拟血吸虫RA疫苗保护性T细胞抗原提供基础。方法应用生物信息学技术预测SjPSAP的信号肽及T细胞表位,分子生物学技术克隆和表达SjPSAP分子,免疫荧光检测其定位,人工合成预测肽,MTT法测定免疫鼠脾淋巴细胞的增殖、ELISA法检测细胞上清的细胞因子,流式细胞术检测胞内细胞因子和预测肽表位结抗原提呈细胞情况。结果成功克隆和表达重组蛋白(rSjPSAP);该重组蛋白可被其免疫小鼠血清和感染日本血吸虫的小鼠阳性血清所识别,重组蛋白免疫鼠血清还可以识别7d、14d、23d、32d和42d的血吸虫虫体蛋白,且发现该分子定位于虫体体被的表膜。用人工合成的预测肽11条肽免疫小鼠,检测到预测肽中有5条肽明显刺激脾淋巴细胞的增殖;ELISA法检测有6条预测肽在刺激后,脾细胞分泌至上清中的IFN-γ量显著增加,其中5条肽分泌Th1细胞因子IFN-γ的CD4+T细胞的比例要高于分泌Th2细胞因子IL-4的CD4+T细胞的比例,流式细胞术检测其中的4条肽体外直接结合鼠脾细胞实验发现这些肽表位结果,它们都可以很好地与小鼠抗原递呈细胞直接结合。结论鉴定了sjPSAP蛋白分布于虫体的体被膜中,可能含4个潜在的Th1细胞表位,为进一步高效合理地发现抗血吸虫的保护性T细胞抗原或表位提供了一定的理论和实验依据。

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