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以18S rRNA和ITS为靶基因的牛环形泰勒虫LAMP检测方法的建立

刘爱红  关贵全  刘志杰  刘军龙  李有全  马米玲  牛庆丽  任巧云  白启  殷宏  罗建勋  
【摘要】:牛环形泰勒虫病又称热带泰勒虫病(Tropical theileriosis),是一种严重威胁热带和亚热带地区经济发展的重要寄生虫病。笔者以牛环形泰勒虫核糖体18S rRNA和ITs为靶基因,建立牛环形泰勒虫的LAMP检测方法。每个靶基因的引物对包含四个引物,且每对引物只识别靶基因上的六个特异的区域,以便高效、特异的的检测牛环形泰勒虫。本研究以实验室液氮保存的我国新疆、宁夏、内蒙和河南的标准虫株为模板,在纯化的裂殖子中提取基因组DNA,扩增出特异的瀑布状条带,且与牛的瑟氏泰勒虫、中华泰勒虫、牛巴贝斯虫、双芽巴贝斯虫、卵形巴贝斯虫、大巴贝斯虫、牛巴贝斯虫未定种、牛边虫阳性基因组DNA、泰勒虫阴性牛基因组DNA均没有交叉反应。该方法敏感性较高,能检测到0.1pg/μl的牛环形泰勒虫裂殖子基因组DNA。以已建立的LAMP方法和常规PCR方法,对实验室感染的未除脾牛进行检测,自感染后18天至105天,可在感染牛的血液检到牛环形泰勒虫;对采自我国新疆、甘肃、河南、河北、吉林和黑龙江等省份的351份野外样品进行同样的检测,其LAMP和PCR方法检测的阳性率分别为24.5%和18.2%。这些结果显示:LAMP方法具有简单、快速、成本低、特异性和敏感性好的特点,可用于牛环形泰勒虫病的现场快速检测,具有广阔的应用前景。

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