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牛源犬新孢子虫MAG1基因的克隆及原核表达

焦石  贾立军  薛书江  刘明明  黄国明  张守发  
【摘要】:为了解牛源犬新孢子虫MAG1基因的生物学特性。本试验应用PCR技术扩增牛源犬新孢子虫MAG1基因,将PCR产物连接到pMD18-T Simple载体,构建pMD18-T-MAG1克隆质粒,PCR鉴定、酶切鉴定及测序分析后,将MAGl基因连接到原核表达载体pGEX-4T-2上,构建重组表达质粒pGEX-4T-MAGl,转化大肠杆菌.BL21,筛选阳性克隆,将PCR鉴定和酶切鉴定正确的重组质粒进行诱导表达,SDS-PAGE和Western-blotting分析表达产物。结果表明,扩增的MAG1基因片段大小为1047bp,编码349个氨基酸,具有完整的开放阅读框,与GenBank中发表的MAG1(EF580924.1)核苷酸序列同源性为99%;Western blot分析表达蛋白的分子量为65 ku,具有较好的反应原性。本试验为新孢子虫病疫苗及诊断试剂盒的研究奠定了基础。

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