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堆型艾美耳球虫乳酸脱氢酶基因的克隆与表达

宋鸿雁  严若峰  徐立新  宋小凯  李祥瑞  
【摘要】:克隆了堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)乳酸脱氢酶(LDH)基因(EaLDH),并在大肠杆菌中成功表达出重组蛋白。根据GenBank中收录的EaLDH核苷酸序列设计特异性引物,以其第一代裂殖体总RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增获得EaLDH基因。将EaLDH基因片段与原核表达载体pET28a连接,构建重组表达质粒pET28a-LDH,并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。结果表明,扩增出的EaLDH基因含993 bp的开放阅读框,与GenBank中收录的EaLDH基因序列相似性为98%。诱导后,重组蛋白能够在大肠杆菌中高效表达,融合蛋白相对分子质量约为4.1×10~4。

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