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猪白介素1 5(IL-1 5)基因克隆及其慢病毒载体的构建

于福先  潘建治  朱志伟  陈晓宇  
【摘要】:白介素15具有广泛的分子生物学活性,在T细胞的免疫应答中起重要的作用。研究中参照GeneBank中内江猪IL-15序列(登录号:EU234503.1)设计引物,并在引物5'端分别加入NotⅠ和BamHⅠ酶切位点。取成年商品猪脾细胞,用Trozol法提取mRNA,并反转录成cDNA,PCR法从cDNA中克隆猪IL-15基因,将获得的基因序列克隆入pEASY-Blunt Simple(TransGen Biotech)载体中,挑取阳性克隆进行PCR验证并测序。测序结果表明:与参考猪IL-15序列相比,在获得的489个核苷酸中,共有6个碱基发生突变,分别为第20,90,119,287,312,393位核苷酸由G,G,C,A,C,A依次突变为A,C,G,G,T,T,核苷酸同源性达98.77%;所编码的氨基酸在第7,40,96位发生错义突变,分别由半胱氨酸,苏氨酸,组氨酸突变为酪氨酸,丝氨酸,精氨酸,而第30,104,131位氨基酸发生同义突变,氨基酸同源性为98.15%。研究结果表明:已成功克隆猪IL-15编码区序列,且IL-15的核苷酸序列及氨基酸序列存在多态性。将获得的IL15序列克隆入慢病毒载体CS II-EF-MCS-IRES2-Venus中,为慢病毒的包装及应用慢病毒介导法制备转基因猪奠定基础。

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