猪白介素1 5(IL-1 5)基因克隆及其慢病毒载体的构建

【摘要】：白介素15具有广泛的分子生物学活性,在T细胞的免疫应答中起重要的作用。研究中参照GeneBank中内江猪IL-15序列(登录号:EU234503.1)设计引物,并在引物5'端分别加入NotⅠ和BamHⅠ酶切位点。取成年商品猪脾细胞,用Trozol法提取mRNA,并反转录成cDNA,PCR法从cDNA中克隆猪IL-15基因,将获得的基因序列克隆入pEASY-Blunt Simple(TransGen Biotech)载体中,挑取阳性克隆进行PCR验证并测序。测序结果表明:与参考猪IL-15序列相比,在获得的489个核苷酸中,共有6个碱基发生突变,分别为第20,90,119,287,312,393位核苷酸由G,G,C,A,C,A依次突变为A,C,G,G,T,T,核苷酸同源性达98.77%;所编码的氨基酸在第7,40,96位发生错义突变,分别由半胱氨酸,苏氨酸,组氨酸突变为酪氨酸,丝氨酸,精氨酸,而第30,104,131位氨基酸发生同义突变,氨基酸同源性为98.15%。研究结果表明:已成功克隆猪IL-15编码区序列,且IL-15的核苷酸序列及氨基酸序列存在多态性。将获得的IL15序列克隆入慢病毒载体CS II-EF-MCS-IRES2-Venus中,为慢病毒的包装及应用慢病毒介导法制备转基因猪奠定基础。

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前20条

1	谭碧君;;转基因动物中慢病毒载体包装的优化[J];上海畜牧兽医通讯;2008年02期
2	谭碧君;;慢病毒载体在制备转基因动物中的最新进展[J];上海畜牧兽医通讯;2010年01期
3	孙岩;陈胜;王蒙;刘红林;;HIV-1慢病毒载体的发展及其生物安全性[J];安徽农业科学;2007年23期
4	彭徐;;慢病毒载体研究进展[J];西昌学院学报(自然科学版);2007年03期
5	张蕊;龚道清;;慢病毒载体的研究进展及应用[J];中国畜牧兽医;2010年06期
6	孙克宁;朱化彬;林峰;王栋;郝海生;杜卫华;赵学明;;慢病毒载体的构建及其应用于转基因动物的研究进展[J];中国畜牧兽医;2010年08期
7	陈龙;杨晓红;徐敏;朱碧波;陈焕春;曹胜波;;表达乙型脑炎病毒PrM-E基因慢病毒载体的构建[J];中国兽医科学;2011年04期
8	尹春光;杜立新;;慢病毒载体构建策略及生物安全性研究进展[J];动物医学进展;2008年02期
9	曹鸿国;李运生;曲秀霞;;慢病毒载体介导成纤维细胞高效稳定表达绿色荧光蛋白[J];中国农学通报;2008年07期
10	张磊;刘庆友;胡天;张晓溪;崔奎青;陆凤花;石德顺;;第三代慢病毒高效率包装系统的建立[J];基因组学与应用生物学;2009年02期
11	李英明;陈燕慧;;慢病毒载体介导RNAi的研究进展[J];生物技术通报;2009年07期
12	丁红梅;徐世永;邵根宝;孙岩;王蒙;刘红林;;慢病毒载体体外转染鸡胚原始生殖细胞[J];农业生物技术学报;2007年04期
13	朴庆林;于永生;罗晓彤;金海国;;山羊乳腺特异性表达慢病毒载体的构建与验证[J];安徽农业科学;2009年31期
14	王东洋;贾路;陈翀;李艳杰;曾令宇;;鼠VEGF红色荧光慢病毒载体的构建及其在293T细胞中的表达[J];四川大学学报(医学版);2010年02期
15	陈平;胡涛;薛敬礼;杜春燕;章金涛;朱奎成;金树兴;王纯耀;;利用慢病毒载体快速建立表达外源基因的哺乳动物细胞系[J];生物技术通报;2011年07期
16	朱贵明;陈宏;高强;陈红星;邓继先;;表达sFat-1基因慢病毒载体的构建及病毒生产[J];西北农林科技大学学报(自然科学版);2007年06期
17	徐敏;杨晓红;陈龙;李么明;叶静;陈焕春;毕丁仁;曹胜波;;慢病毒载体介导的西尼罗河病毒prME蛋白的表达[J];中国兽医科学;2010年08期
18	郝林琳;于浩;李莉;王博;王佳;刘松财;张永亮;;慢病毒介导的小鼠生长抑素shRNA序列的设计和筛选[J];中国兽医学报;2011年01期
19	刘飞;刘炳婷;白亮;杨公社;;猪Sirt2慢病毒干扰载体的构建[J];黑龙江畜牧兽医;2011年01期
20	刘吉宏;李峰;郝子悦;李碧春;陈学进;;慢病毒载体法制备转基因动物研究进展[J];动物医学进展;2008年02期

中国重要会议论文全文数据库

前10条

1	于福先;潘建治;朱志伟;陈晓宇;;猪白介素1 5(IL-1 5)基因克隆及其慢病毒载体的构建[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集（上册）[C];2010年
2	王海彬;;雌激素相关受体α基因超表达慢病毒载体的构建[A];中华医学会第六次全国骨质疏松和骨矿盐疾病学术会议暨中华医学会骨质疏松和骨矿盐疾病分会成立十周年论文汇编[C];2011年
3	高书颖;于洁;;携带hTERT基因的重组慢病毒载体的构建及鉴定[A];“细胞活动生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会论文摘要集[C];2011年
4	蔡伟光;丁景华;习欠云;肖敏;江青艳;吴珍芳;张永亮;;慢病毒与精子孵育法介导转基因猪的制备[A];全国动物生理生化第十一次学术交流会论文摘要汇编[C];2010年
5	于洁;高书颖;;携带hTERT基因的重组慢病毒载体的构建[A];中国的遗传学研究——遗传学进步推动中国西部经济与社会发展——2011年中国遗传学会大会论文摘要汇编[C];2011年
6	徐敏;杨晓红;陈龙;叶静;李么明;陈焕春;曹胜波;;慢病毒载体介导表达西尼罗河病毒prME蛋白[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会论文集[C];2010年
7	刘峰;肖兴鹏;田玉科;;大鼠蛋白激酶Cγ可控shRNA慢病毒的构建与鉴定[A];2011年全国医药学术论坛交流会暨临床药学与药学服务研究进展培训班论文集[C];2011年
8	宋喜;张克让;;慢病毒介导的过表达GSK3β小鼠与抑郁障碍发生的研究[A];中华医学会精神病学分会第九次全国学术会议论文集[C];2011年
9	刘竞;余锋;桂嵘;李昕;蒋铁斌;王二华;李颖;王成红;唐雪元;陈方平;;Survivin shRNA慢病毒载体构建[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年
10	薛美思;刘毅;;携带人胰岛素基因慢病毒载体转染脐带间充质干细胞的实验研究[A];中华医学会整形外科学分会第十一次全国会议、中国人民解放军整形外科学专业委员会学术交流会、中国中西医结合学会医学美容专业委员会全国会议论文集[C];2011年

中国博士学位论文全文数据库

前10条

1	韦烨;基因改造骨髓造血干细胞靶向抑制结直肠癌新生血管形成的实验研究[D];复旦大学;2010年
2	俞晓岚;过表达CXCR4的骨髓间质干细胞移植治疗大鼠脑梗死的疗效观察[D];福建医科大学;2010年
3	刘瑜;BTBD10在人脑胶质瘤中的表达及其对U251细胞株增殖和凋亡的影响[D];第二军医大学;2010年
4	林恒;线粒体转录因子A在重组人肝再生增强因子对梗阻性黄疸大鼠肝功能保护中的作用机制研究[D];第三军医大学;2009年
5	林文平;脑红蛋白基因修饰的骨髓间充质干细胞对兔脊髓损伤保护作用的实验研究[D];福建医科大学;2011年
6	王鹏;依赖p53的癌基因Wip1在人脑胶质瘤细胞恶性增殖机制中的作用研究[D];华中科技大学;2010年
7	吕学军;Caveolin-1在LPS诱导AT-1细胞和小鼠肺部急性损伤中的作用及机制研究[D];第三军医大学;2010年
8	苏冠华;肝细胞生长因子基因修饰的骨髓间充质干细胞移植的促血管新生作用[D];华中科技大学;2010年
9	杨志峰;应用慢病毒载体介导RNA干扰在MCF-7细胞中剔降IKKα基因和制备转基因小鼠模型的研究[D];第二军医大学;2006年
10	陈柏龄;慢病毒载体介导血管生成素-1基因修饰的骨髓间充质干细胞移植治疗脑梗死的实验研究[D];福建医科大学;2007年

中国硕士学位论文全文数据库

前10条

1	马贵亮;慢病毒载体介导的TNF-α基因在脐血间充质干细胞中的表达的实验研究[D];青岛大学;2010年
2	栾冲;可诱导表达hBMP-2基因的慢病毒载体的构建及其慢病毒的产生和鉴定[D];青岛大学;2010年
3	陈豪;乙肝病毒X基因（HBVX）慢病毒载体的构建和鉴定[D];福建医科大学;2011年
4	陈春;携带大鼠Foxp3基因慢病毒载体的构建及慢病毒包装的研究[D];安徽医科大学;2011年
5	沈上杭;短发夹RNA抑制缺氧诱导因子-1α表达对脑胶质瘤细胞增殖、侵袭及转移的影响[D];福建医科大学;2010年
6	盛鹏程;绵羊Myostatin基因shRNA慢病毒载体的构建与鉴定[D];山东农业大学;2011年
7	魏衍全;慢病毒介导shRNA稳定持续抑制口蹄疫病毒增殖的两类细胞系的建立[D];中国农业科学院;2011年
8	刘伟;小鼠趋化因子MIP-1α和共刺激分子B7-1基因重组慢病毒载体的构建及鉴定[D];福建医科大学;2011年
9	张晓宇;含LfcinB基因慢病毒载体的构建及体外对SKOV3细胞作用的研究[D];安徽医科大学;2011年
10	张国峰;慢病毒载体介导的RNAi抑制牛整联蛋白亚基αv基因表达的研究[D];中国农业科学院;2011年

中国重要报纸全文数据库

前8条

1	辛紫;中国俩科学家创新项目入选[N];医药经济报;2009年
2	本报记者郑灵巧;十万美元验证一个新点子[N];健康报;2009年
3	张田勘;基因疗法:沉寂之后的复苏?[N];南方周末;2009年
4	记者任海军;基因疗法卷土重来人类顽疾有望治愈[N];经济参考报;2010年
5	记者徐亚静;抑制VCAM——1表达可减少颈动脉术后再狭窄[N];中国医药报;2010年
6	记者师巧梅;我区绵羊转基因研究取得重大突破[N];新疆日报(汉);2010年
7	记者王菲胡江;新疆科学家“破解”绵羊转基因技术“密码”[N];新疆科技报(汉);2010年
8	记者王小龙;人造病毒可给艾滋病病毒定位[N];科技日报;2011年

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