牛精子总RNA制备及mRNA线性扩增的初步研究

【摘要】：成熟精子蕴含了高等生命繁衍后代的重要生命信息,而精子mRNA是这些生命信息的重要成分之一,成功制备并获得足够数量和高质量的精子mRNA对于开展精子基因表达分析具有重要现实意义。本研究采用改进的热TRIzol法提取了奶牛精子总RNA,RT-PCR检测了总RNA的质量,结果表明,提取的总RNA具有良好的完整性,且没有基因组DNA污染,总RNA提取过程中体细胞去除效果良好,但所制备的RNA量非常少,为进行后续的精子基因表达检测分析,采用RNA线性扩增技术对mRNA进行了两轮扩增,RNA定量分析及电泳检测结果表明,扩增后的aRNA片段大小及OD比值都较为理想并且使mRNA量显著提高,为高通量的精子RNA表达研究奠定了实验基础。