【摘要】：猪转基因体细胞克隆技术在异种器官移植、构建疾病模型、改进生产性状等方面有广泛的用途。本研究旨在建立巴马小型猪转基因体细胞克隆技术体系。体外培养新生巴马小型猪的肾脏成纤维细胞,利用脂质体法获得转绿色和红色荧光蛋白的转基因细胞。利用体细胞克隆技术研究红色荧光蛋白克隆胚胎的体内外发育潜能。结果显示:试验一,细胞转染并筛选后,获得转红色荧光蛋白和绿色荧光蛋白基因的肾脏成纤维细胞,转红色荧光蛋白的细胞可以在体外生长到35代以上,可以满足体细胞克隆对于供体细胞的需求。试验二,荧光去核的转基因胚胎与盲吸法去核转基因胚胎分裂率(92.5%vs.86.8%,p0.05)和桑囊胚发育率(26.9%vs.34.0%,p0.05)相比差别均不显著,但囊胚发育率(3.0%vs.13.2%,p0.05)差异显著。说明荧光去核对于转基因胚胎的发育影响较大。试验三,转基因胚胎、非转基因胚胎和孤雌激活胚胎的胚胎分裂率(79.0%,78.5%vs.80.2%,p0.05)、囊胚发育率(20.3%,16.6%vs.22.6%,p0.05)和桑囊胚发育率(45.5%,4 7.5%vs.57.4%,p0.05)的差别均不显著。其中转基因胚胎与非转基因胚胎各个指标处于同一水平。说明G418筛选并未影响到转基因胚胎的发育。试验四,分别在夏季和冬季利用巴马小型猪肾脏成纤维细胞克隆胚胎和转红色荧光蛋白克隆进行了胚胎移植。移植转基因胚胎的受体猪有两头在1-2个情期内返情,剩余两头均在两个情期外出现怀孕特征,但最终并未产仔。总之,本研究初步建立了巴马小型猪的转基因体细胞克隆体系,为生产转基因猪奠定了基础。