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NCSU-37培养猪卵母细胞成熟与体外受精研究试验初报

朱志伟  潘建治  陈晓宇  于福先  
【摘要】:猪卵母细胞的体外成熟(maturationin vitro,IVM)与体外受精(in vitro fertilizatio)可以为猪体细胞克隆、转基因猪的研究提供大量M_(Ⅱ)期卵母细胞与早期受精胚胎。卵母细胞的成熟质量影响到其受精后的早期胚胎发育,核质成熟同步是提高体外成熟卵子与体外受精效率的重要环节,选择适合的成熟液对猪卵母细胞的体外成熟极其重要。不同的成熟液培养猪卵母细胞,对猪卵母细胞内的组蛋白H1激酶波动模式、核成熟率、谷胱苷肽浓度、体外受精后的原核形成率、桑椹胚率、囊胚率发育率等都有影响。本研究采用的体外成熟培养液是NCSU-37培养基,添加了抑制卵子GVBD的延发的dbcAMP,猪卵泡液(PFF),PMSG+HCG激素组合(CG),巯基乙醇(β-ME),分2个阶段进行培养,前段添加激素20-22h,后段无激素培养22h。体外授精培养液改良的PGM(参考yoshioka,2003),发育培养液是改变于yoshioka(2002)的最新PZM-5,培养条件是CO_2 5%,39℃饱和湿度。试验结果统计表明:共4批次采集有效COGs 1128枚,添加dbcAMP0.01mM,CG1IU/UL的体外成熟卵子24h-48h授精卵裂率达61.79%(697/11 28),PZM-5发育液有效突破4-胞期阻碍,受精桑、囊胚发育率达10.33%(72/697)。为下一步转基因猪的研究与生产提供充足的早期胚胎来源奠定了技术基础。

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