实时荧光定量PCR检测猪流感病毒方法的建立

【摘要】：建立了Taqman实时荧光定量PCR方法检测猪流感病毒(SIV)。选取SIV病毒的序列设计引物和探针。以梯度稀释的含有SIV目的扩增片段的质粒作为标准品,进行定量PCR反应以确定检测灵敏度。2.0*108～2.0*102个拷贝,7个数量级的范围内定量PCR有"S"型扩增曲线,检测灵敏度为20个拷贝。根据病毒拷贝数与定量反应Ct值的关系,绘制了标准曲线。该方法具有特异性,对猪瘟病毒,伪狂犬病毒,口蹄疫病毒和蓝耳病病毒核酸都没有扩增反应。实时定量PCR检测SIV的方法,灵敏度高,特异性好,可以进行定量分析,在猪流感的快速检测上具有重要意义。

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前20条

1	冉智光,童光志,孔令达,张绍杰,王玫,李亚香,王玉春,崔益珠;伪狂犬病弱毒疫苗与野毒株PCR鉴别诊断方法的建立[J];中国预防兽医学报;1998年02期
2	刘松财,张玉静,欧阳红生,张永亮,刘万臣,黎诚耀,赵建军,金扩世,汪玉松;牛β-酪蛋白基因上游调控序列PCR扩增及克隆[J];中国兽医学报;1998年01期
3	丁家波,赵文明,金文杰;鸡贫血病的最新研究进展[J];动物医学进展;2001年01期
4	王三虎,何宏轩;应用聚合酶链反应诊断魏氏梭菌病[J];中国预防兽医学报;2002年04期
5	布日额,王君伟,吴金花,杨志,李勐;GPV野毒株鉴定及其致病力试验[J];中国家禽;2003年16期
6	杨建民,王骊山,姜小军,蒋耀青,刘连瑞;孕牛外周血中胎儿Y-特异性序列的检测[J];生物工程学报;1996年03期
7	王云飞,孟秀珍;用毛细管电泳检测伊氏锥虫微环DNAPCR扩增产物[J];中国兽医寄生虫病;1998年01期
8	王嘉福,冉雪琴;聚合酶链反应扩增大肠杆菌志贺样毒素基因[J];中国兽医杂志;1999年11期
9	朱伟云,姚文,BWilliams,ADLAkkermans,STamminga,韩正康;动物饲料与胃肠道微生物区系:胃肠道微生物区系的营养生态学[J];动物营养学报;1999年S1期
10	娄华,白挨泉,顾万军,贺东升,刘福安;番鸭细小病毒弱毒株VP2基因的序列分析[J];中国兽医科技;2002年06期
11	倪艳秀,何孔旺,王继春,何家惠,还红华,吕立新,陆承平,姚火春;猪链球菌2型的PCR快速检测[J];中国兽医学报;2002年05期
12	肖海霞,陈从英,陈静波,海丽且木,王敬军,郑新宝,罗永明,沙米,王国梁;应用PCR技术鉴定牛早期胚胎性别方法优化的研究[J];云南畜牧兽医;2002年04期
13	涂健,祁克宗,潘鑫;PCR在畜禽疫病诊断上的应用及研究进展[J];动物医学进展;2004年03期
14	李华伟;武聚富;庄英华;高飞;吴国娟;;鸡传染性支气管炎病毒M41型的扩繁及在鸡胚肾细胞上的适应性研究[J];北京农学院学报;2011年03期
15	周志江,郑明光,郑昊,孙伟斌,张让堂,黄上媛,汪力亚,王丽,李景云;应用PCR检测产vero毒素大肠杆菌[J];中国兽医学报;1998年04期
16	任克良,梁全忠,毛杨毅;PCR法鉴别牛胚胎性别技术研究[J];山西农业科学;2000年02期
17	牛树理,刘为敏,杭苏琴,冯紫云;H-Y单抗检测方法初探[J];中国畜牧杂志;2001年06期
18	郭霄峰,廖明,严英华,李剑峰,辛朝安;利用PCR检测鸭瘟病毒[J];中国兽医科技;2002年04期
19	禹学礼,栗颖华;PCR在动物胚胎性别鉴定中的应用[J];洛阳农业高等专科学校学报;2002年01期
20	马有智,方维焕,柯春林,张晓峰;猪链球菌2型JX分离株的生物学特性[J];中国兽医学报;2003年04期

中国重要会议论文全文数据库

前10条

1	王峰;刘青;王晓伟;陈洪博;于琳琳;王玥;姜艳萍;成子强;;实时荧光定量逆转录PCR检测禽白血病病毒J亚群(ALV-J)[A];中国畜牧兽医学会2010年学术年会——第二届中国兽医临床大会论文集(下册)[C];2010年
2	李昂;刘丽平;肖文权;王光瑛;连森阳;彭亮;翁辉;吴旭;;番鸭GH基因实时荧光定量PCR检测方法的建立[A];安全优质的家禽生产——第十五次全国家禽学术讨论会论文集[C];2011年
3	任伟;杨利峰;赵德明;;实时荧光定量PCR构建朊病相关蛋白P38MAPK标准品质粒和标准曲线[A];中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2010年学术年会（第三届中国兽药大会学术论坛）论文集[C];2010年
4	张太翔;凌宗帅;徐彪;梁成珠;朱来华;孙军;王洪兵;;实时荧光定量PCR检测猪流感病毒方法的建立[A];动物检疫学分会2010年学术年会论文集[C];2010年
5	任静强;朱占波;金扩世;金宁一;鲁会军;;重组鸡痘病毒外源基因表达的实时荧光定量PCR检测方法建立[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年
6	祝秀梅;马全英;王凡;吕志慧;杜平;刘学荣;牟克斌;;猪繁殖与呼吸综合征病毒基因重组质粒实时荧光定量PCR标准曲线的建立[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
7	潘康成;冯兴;崔恒敏;张亚兰;赵爽;;实时荧光定量PCR检测鸡口服枯草芽孢杆菌后肠道芽孢杆菌数量变化[A];第四届第十次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛论文集（下册）[C];2010年
8	谭诗文;余波;冉懋韬;蔡一鸣;艾玉萍;王璇;张华;;牛源HBV套式PCR方法建立及其S靶基因同源性分析[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会论文集[C];2010年
9	范晴;谢芝勋;刘加波;庞耀珊;邓显文;谢志勤;谢丽基;彭宜;;TaqMan实时荧光PCR快速检测牛病毒性腹泻病毒[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会论文集[C];2010年
10	王荣;孔繁德;陈琼;吴德峰;徐淑菲;;SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测猪繁殖与呼吸综合征毒[A];福建省畜牧兽医学会2009年学术年会论文集[C];2009年

中国博士学位论文全文数据库

前10条

1	张在平;荧光定量PCR检测禽白血病病毒与RNA干扰抑制J亚群禽白血病病毒复制的研究[D];内蒙古农业大学;2010年
2	马孟根;猪源致病性沙门氏菌耐药基因PCR和基因芯片检测技术研究[D];四川大学;2005年
3	王春雨;结核杆菌Taqman PCR检测方法建立及吉林省鹿结核杆菌MLVA分型研究[D];吉林农业大学;2011年
4	李明凤;猪伪狂犬病毒、细小病毒和圆环病毒2型多重SYBR Green Ⅰ实时PCR检测方法的建立[D];河南农业大学;2009年
5	牛伟;PRRSV和CSFV实时荧光定量PCR方法的建立及PRRSV M蛋白重组质粒实验免疫研究[D];吉林大学;2012年
6	张晶波;荧光定量PCR检测立克次体[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年
7	辛九庆;牛传染性胸膜肺炎诊断技术与分子流行病学研究[D];吉林农业大学;2007年
8	朱德康;鸭疫里默氏杆菌荚膜多糖输出蛋白基因的发现及其免疫原性研究[D];四川农业大学;2006年
9	曲连东;猪圆环病毒2型地方株的分离鉴定和诊断方法的建立及应用[D];南京农业大学;2006年
10	王劼;猪源肠毒素大肠杆菌K88ac和F18ac菌毛蛋白基因的表达及其在卵黄抗体生产中的应用[D];华中农业大学;2007年

中国硕士学位论文全文数据库

前10条

1	王韬;应用TaqMan-MGB探针实时定量PCR技术检测猪KIT基因型的研究[D];山东农业大学;2010年
2	刘志国;实时多重荧光PCR快速鉴别布鲁菌方法的建立[D];内蒙古农业大学;2010年
3	李光辉;布鲁氏菌荧光定量PCR快速检测方法的建立及检测试剂盒的组装[D];吉林大学;2006年
4	刘新军;表达布氏杆菌sodc基因的重组沙门氏菌的构建及不同种布氏杆菌鉴别PCR检测方法的建立[D];华中农业大学;2010年
5	郑升博;猪链球菌多重PCR检测方法的建立及屠宰场样品感染率的调查研究[D];上海交通大学;2010年
6	王文娟;食源性致病菌多重PCR检测试剂盒的研制与应用[D];山东农业大学;2011年
7	商晓桂;猪星状病毒的分离鉴定和荧光定量PCR检测方法的建立[D];内蒙古农业大学;2010年
8	冯海永;羊肉产品肉种来源的分子追溯研究[D];中国农业科学院;2010年
9	李博;布鲁氏菌PCR检测方法的应用与分子分型研究[D];新疆农业大学;2010年
10	刘大伟;猪瘟兔化弱毒疫苗株荧光定量RT—PCR检测方法的建立及初步应用[D];安徽农业大学;2010年

中国重要报纸全文数据库

前10条

1	季爱华;饲料中牛羊源性成分测定新法通过审定[N];中国食品报;2009年
2	;饲料中牛羊源性成分测定法标准通过审查[N];中国畜牧兽医报;2009年
3	记者瞿剑;猪是否“感冒”五小时见分晓[N];科技日报;2009年
4	;冬季防两种疾病[N];中国畜牧兽医报;2009年
5	记者李天舒;人和猪流感病毒在猪体内重排现象增加[N];健康报;2009年
6	本报记者陆振华;中国短时间内可研制出疫苗[N];21世纪经济报道;2009年
7	唐志强;甲型流感研究“重归原点”[N];新华每日电讯;2009年
8	上海恒丰强动物药业有限公司技术部高怀涛;一例猪感冒的诊治[N];中国畜牧兽医报;2009年
9	江夏;哪些动物可能感染禽流感[N];人民日报;2004年
10	比利美英伟营养饲料(深圳)有限公司总经理李职;健康饲料造就健康食品[N];中国畜牧兽医报;2009年

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