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猪白细胞介素-6的原核表达及其生物学活性研究

马文涛  闫若潜  吴志明  刘光辉  盛敏  谢彩华  
【摘要】:本研究采用RT-PCR方法自细菌脂多糖(LPS)刺激的猪脾脏细胞总RNA中扩增克隆出了猪白介素-6(porcine inteleukin-6,PoIL-6)成熟肽基因,并亚克隆入pQE30载体进行原核表达,对表达的融合重组猪白介素-6(rPoIL-6)蛋白通过尿素变性、低浓度复性液复性、PBS溶液透析等步骤进行纯化,采用rPoIL-6 ELISA试验方法检测rPoLL-6蛋白与抗PoIL-6单抗发生特异性免疫反应的活性.采用MTS法检测rPoIL-6蛋白在猪脾脏细胞上的增殖活性.结果表明:成功克隆了rPoIL-6成熟肽基因,基因全长555bp;表达的rPoIL-6蛋白分子量大小约为20Ku;经纯化后的蛋白质纯度在95%以上;rPoIL-6蛋白能和抗PoIL-6单抗发生特异性反应,同时具有促进猪脾脏细胞的增殖活性.

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