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猪源乙型脑炎病毒NJ2008株E138位突变病毒的构建与生物学特性初步研究

张羽  曹瑞斌  顾金燕  陈溥言  
【摘要】:猪是流行性乙型脑炎病毒在自然界的主要扩增宿主,与人类乙脑的发生密切相关。乙型脑炎病毒NJ2008株是从母猪流产病料中分离得到,经分析发现,该病毒为强毒株。已经有研究发现,乙型脑炎病毒E蛋白的138位氨基酸对于该病毒的毒力强弱起到至关重要的作用,所以本研究以乙脑病毒NJ2008株全长感染性克隆为亲本,利用反向遗传技术将该病毒的E蛋白138位谷氨酸(Glu)突变为赖氨酸(Lys),构建了突变株的全基因感染性克隆。将其转染乳仓鼠肾细胞(BHK-21),72h后出现病变,并在BHK-21细胞中盲传3代,通过病毒蚀斑形成试验、间接免疫荧光和荧光定量RT-PCR等方法与亲本感染性克隆株对比分析其感染性的差异。结果表明,突变病毒的蚀斑数和荧光数明显比亲本株少;在感染2~3d后,细胞内病毒RNA的量大约是亲本株的1/3。从细胞水平可以看出,突变株病毒的致病力有所减弱,这将为猪源乙型脑炎病毒减毒活疫苗的研制提供了一个良好平台。

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