长春碱纳米粒的制备及其抗肿瘤活性的研究

【摘要】：【目的】长春碱(vinblastine,VLB)是从夹竹桃科植物长春花中提取的二聚吲哚类生物碱,其通过抑制微管蛋白聚合而具有较强的抗肿瘤药理活性。但其毒性大、半哀期短且易使肿瘤细胞产生多药耐药性成为临床应用的弊端。研究表明,抗肿瘤药物的纳米制剂可延长药物半衰期,降低毒副作用,逆转肿瘤细胞的多药耐药性。本研究以聚氰基丙烯酸丁酯为载体,右旋糖苷70000为稳定剂,制备长春碱聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒(VLB-PBCA-NP),并研究其对神经胶质瘤细胞BT325的形态影响,以期能降低药物使用剂量,增强抗肿瘤活性,降低毒副作用。【方法】采用乳化聚合法制备VLB-PBCA-NP,在20mL0.01moL/L盐酸中加入1%右旋糖苷70000(0.2g),用磁力搅拌器以600rpm的速度搅拌,加入100mgVLB后缓慢滴加1%(0.2mL)氰基丙烯酸丁酯,室温下搅拌8h后。10μm滤膜过滤。通过透射电子显检测纳米粒形态,激光粒度分析仪测定其粒径:紫外分光光度计在214.5nm波长处测定吸光度,根据标准曲线计算药物含量、包封率和载药量:用含20%胎牛血清的DMEM培养基在37℃、5%CO_2条件下体外培养神经胶质瘤BT325细胞,以500ng/mL的VLB原料药和VLB-PBCA-NP作用于神经胶质瘤细胞BT325,48h后观察BT325细胞形态变化,Hoechst33342荧光染色观察细胞凋亡。【结果】VLB-PBCA-NP在透射电子显微镜下的形态为圆形,粒径均匀,分散性好,其平均粒径为74.4nm,其中约80%粒子的粒径在60～100nm,粒径分布较窄。该纳米粒的包封率为74.47%,载药量为18.62%。与长春碱原料药组相比,长春碱纳米粒组细胞数量明显减少,细胞间距变大,贴壁能力下降,多数脱落漂浮于培养液中,大多数细胞皱缩变圆,两端突起消失,呈现典型的凋亡细胞形态。Hoechst 33342荧光染色结果显示,正常神经胶质瘤细胞BT325呈均匀荧光,VLB原料药组和VLB-PBCA-NP组出现明显亮蓝色荧光。与VLB原料药组相比,VLB-PBCA-NP组细胞数量明显减少,多数脱落漂浮于培养液中,且胞核凝聚现象显著。【结论】长春碱纳米粒可作为肿痈药物VLB的有效载体,与同浓度的VLB原料药相比,长春碱纳米粒有更强的抗肿瘤活性,为临床减少VLB的使用剂量、降低毒副作用提供新的思路。