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CSFV E2逆转录病毒表达载体的构建及其稳定表达哺乳动物细胞系的建立

曲会  李素  郭焕成  赵福广  涂长春  
【摘要】:目的:构建猪瘟病毒(CSFV)E2基因的逆转录病毒表达载体,建立稳定表达CSFV E2蛋白的哺乳动物细胞系,为深入开展CSFV E2基因的研究奠定基础。方法:从质粒pCDSW、pCDST中扩增CSFV E2(SW、ST)基因,构建重组逆转录病毒表达载体pLXRN-SW-HIS、pLXRN-ST-HIS,将重组质粒转染哺乳动物细胞PK-15,通过PCR、ELISA、IFA和Western-blot的方法检测E2蛋白的表达,G418抗生素500μg/mL培养基加压筛选后建立稳定表达CSFV E2蛋白的细胞系。结果:重组PK-15细胞连续传代30代,E2蛋白在胞浆中稳定表达,且表达量达到80%以上。结论:成功构建CSFV E2重组逆转录病毒表达载体,并建立了稳定、高效表达CSFV E2蛋白的哺乳动物细胞系,为进一步研究CSFV E2基因与宿主细胞PK-15的相互作用奠定基础。

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