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动物源性人兽共患细菌病防控生物新制剂的研究 Ⅰ.分泌抗大肠杆菌0157:H7单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

夏兴霞  刘洁  王永山  诸玉梅  欧阳伟  何孔旺  张雪寒  
【摘要】:引言/目的:食源性病原微生物已成为当今不断增多的食品安全和突发性公共卫生事件的主要诱因。全世界每年至少有200万人死于以感染性腹泻为主的食源性疾病。在食源性病原微生物中,肠出血性大肠杆菌(EHEC)占有重要地位。O157:H7的感染因具有暴发流行趋势、强烈的致病性与致死性以及抗生素治疗可能会加剧病情等特点,已成为全球性的公共卫生问题,获得简便、快速、敏感、实用的O157:H7快速检测方法仍是当前食源性病原微生物防控研究亟需解决的问题。本研究旨在制备抗O157:H7的系列单克隆抗体,为该病原菌的快速检测、抗原结构分析及其致病机理研究提供技术支撑。材料与方法:将E.coli O157:H7(EHEC-O157:H7)用甲醛灭活超声破碎,免疫BALB/c小鼠,制备免疫脾细胞,与SP/20骨髓瘤细胞融合,建立分泌抗大肠杆菌O157:H7单克隆抗体杂交瘤细胞株。结果与讨论:获得七株分泌抗E.coli O157:H7单克隆抗体(mAbs)的杂交瘤细胞株,分别命名为2E7、B8、E7、D3、H7、F1和C3,Ig亚类分别是IgG2bκ、IgG2aκ、IgG1κ、IgMκ、IgMκ、IgMκ和IgG2aκ。用间接ELISA检测,E7和F1细胞培养上清液的效价为1.6×10~3,腹水效价均为1×10~(11);C3、2E7、B8、D3和H7细胞培养上清液的效价为1×10~1~2×10~2,腹水效价均为4×10~2~2.5×10~6。相加ELISA结果显示,D3和H7 mAbs对应相同的抗原表位,而其它五株对应不同的抗原表位。用间接ELISA分析特异性,2E7、H7和D3为抗EHEC-O157:H7特异性单克隆抗体,其它四株mAbs与某些其他血清型的大肠杆菌有交叉反应。Western blotting表明,C3、E7和F1三株mAbs在蛋白分子量28kD处有特异性条带,2E7、D3和H7三株mAbs在蛋白分子量35kD处有特异性条带,而mAbs B8则未显示蛋白带。本研究制备抗O157:H7的系列单克隆抗体,为该病原菌的快速检测、抗原结构分析及其致病机理研究提供技术支撑。同时,实验结果表明大肠杆菌的抗原成分十分复杂,不同血清型甚至同种血清型不同菌株之间存在着大量的共同抗原表位。

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