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抗鸡NDV囊膜糖蛋白单抗的制备与抗原表位鉴定

赵磊  王旋  龚争  孙涛  丁维民  张训海  
【摘要】:将鸡新城疫病毒(NDV)WF_(00)C株活毒以点眼途径首免BALB/c小鼠,采用超滤技术提纯其完整病毒粒子作为加强免疫原,取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞按常规方法进行细胞融合,筛选鉴定出了2株单抗,分别命名为1B6和4E11。其腹水效价分别为1:3.2×10~5和1:1.6×10~5,对WF_(00)C株、LaSota疫苗株、WF_(00)D株和WF_(00)G株的血凝抑制(HI)效价均在2~(12-15),而与NDV-P/Sdong/1/00株和禽流感病毒H5、H9亚型的标准血凝抗原均无反应性.免疫印迹分析结果显示:1B6没有出现条带,可确定为构象性表位识别单抗,而4E11能够结合血凝素-神经氨酸酶(HN)蛋白;通过谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合表达短肽GST-HN14的免疫印迹分析结果显示,单抗4E11识别的表位在HN蛋白上aa343-355区域内,并经与P/Sdong/1/00等NDV毒株HN氨基酸序列进一步比对,可确定其识别的关键氨基酸为aa347位的谷氨酸和/或aa349位的天冬氨酸。

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