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猪链球菌ZKHY株谷氨酸脱氢酶基因的克隆与序列分析

刘春生  王新娟  徐耀辉  杨霞  陈陆  王川庆  
【摘要】:对猪链球菌ZKHY株的谷氨酸脱氢酶基因(gdh)进行克隆和序列分析,为进一步研究其功能打下基础.以ZKHY的基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增出谷氨酸脱氢酶基因片段,克隆于pMD-18T载体,构建成载体pMD-18T-gdh,转化宿主菌DH5α中进行筛选鉴定和序列测定.测序结果与GenBank已登录序列进行核苷酸和氨基酸的同源性分析.成功地克隆了猪链球菌ZKHY株的谷氨酸脱氢酶基因,序列分析显示ZKHY与已报道的猪链球菌gdh基因有紧密的亲缘关系,核酸序列与2、7、9几个主要致病血清型的同源性在97.2%~98.4%,其中与2型菌株同源性在97.2%~97.3%;与7型菌株在98.4%;与9型在97.6%.其编码的氨基酸序列同源性则更高,与GenBank中已收录的序列同源性在98.9%以上。该分离株可能是属于2,7,9型之外的其它致病的血清型;所克隆的基因在猪链球菌之中非常保守,可以进行表达,进行免疫学方面的相关研究。

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