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乙型脑炎病毒E蛋白在大肠杆菌中的高效表达

张丹  刘昊  鲁会军  金扩世  于长勇  胡博  颜雯  金宁一  
【摘要】:目的将乙型脑炎病毒E蛋白基因克隆至pET-28a(+)表达载体,构建原核表达质粒pET-28a(+)/E,并使该基因在E.coli中高效表达,为进一步研制乙脑早期诊断试剂奠定基础。方法以乙型脑炎病毒疫苗株全基因序列为模板设计引物,通过RT-PCR方法扩增目的片段,将其克隆到pMD18-T载体中,得到克隆质粒pMD18-T/E.pMD18-T/E经XhoⅠ和EcoRⅠ酶切,测序后连接pET-28a(+)载体,构建了重组原核表达质粒pET-28a(+)/E.转化至大肠杆菌BL21(DE3)后,利用IPTG诱导获得高效表达。结果扩增出了1500bp的基因片段,与预期大小一致,测序后经Blast验证与已发表乙型脑炎病毒SA14-14-2株E蛋白基因序列同源性为98%,成功克隆至表达载体pET-28a(+)并获得高效表达,表达产物分子量约为53kDa.结论该表达产物的稳定高效表达为乙脑的诊断试剂开发提供了依据.

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