GST-MrkD融合蛋白的表达纯化、鉴定及其粘附活性研究

【摘要】：通过融合基因表达系统表达GST-MrkD融合蛋白,优化诱导表达条件,亲和层析纯化,Western blot鉴定免疫原性;利用凝血酶切除融合蛋白的GST标签之后,通过粘附活性试验与粘附动力学实验研究了粘附素的生物活性;使用激光共聚焦显微镜定位MrkD蛋白在宿主细胞上的结合部位。实验得到了具有免疫原性的分子量为61KD的融合蛋白(GST-MrkD);切除融合蛋白的GST标签后,定位了粘附素在宿主细胞上的结合部位,并证明了粘附素可以显著影响肺炎克雷伯菌对肺上皮细胞的粘附力。本试验首次证实了MrkD粘附素的粘附阻断作用并观察到了其与宿主细胞的作用位点,为研究肺炎克雷伯菌的致病机制,寻找粘附素功能表位奠定了基础。