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表达鸡传染性喉气管炎病毒GB基因重组鸡痘病毒转移载体的构建

王晓丽  邵卫星  单虎  
【摘要】:根据文献设计2对引物,PCR扩增FPV复制非必需区中外源基因插入位点两侧翼的片段,分别克隆到pUC19和pSK质粒中,并命名为pFP_1和pFP_2。根据文献设计引物,PCR扩增鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)的GB基因的编码区。将GB基因克隆到质粒pFP_1中获得重组质粒pFP_1-GB;用酶切质粒pEGFP,得到GFP片段并克隆到质粒pFP_2中,得到重组质粒pFP_2-GFP。双酶切pFP_1-GB得到FP_1-GB片段,并克隆到质粒pFP_2-GFP中,得到重组质粒pFP_1GB-FP_2GPF。酶切质粒pE/L-7.5,获得背向连接的2个鸡痘病毒启动子片段——PE/L-7.5,并将该片段克隆到重组质粒pFP_1GB-FP_2GPF获得重组质粒pGB-GFP,该质粒即为鸡痘病毒的转移质粒。在质粒pGB-GFP中,2个背向连接的启动子被克隆到的GB和GFP基因之间,分别启动GB和GFP基因的表达。经酶切和测序鉴定pGB-GFP,启动子PE/L和P7.5已分别正确地插入到GB和GFP基因之间,分别启动外源表达基因GB和筛选标记基因GFP的表达,从而证明已获得表达鸡传染性喉气管炎病毒GB基因重组鸡痘病毒转移载体pGB-GFP。该载体为下一步获得表达鸡传染性喉气管炎病毒GB基因的重组鸡痘病毒奠定基础。

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