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布鲁氏菌OMP16重组亚单位疫苗的初步研究

曾政  邓小红  王希良  
【摘要】:布鲁氏菌病是由胞内寄生的布鲁氏菌(Brucella)引起的以流产和发热为特征的人畜共患病,严重威胁着人和多种动物的生命健康;仅在拉丁美洲布鲁氏菌病每年造成6亿美元的损失。疫苗在布鲁氏菌病的防治上发挥了积极的作用,但常规疫苗始终不能有效防止疾病的发生,并且还有诸多副反应,造价高,可能干扰诊断的准确性等等。新兴的重组亚单位疫苗因为具有安全、使用方便,易于制造从而可以克服常规疫苗的不足而得到人们的重视。目前,科学家已经成功获得r L7/L12,并证实其具有明显的免疫保护作用。本研究以流产布鲁氏菌A544基因组DNA为模板采用PCR技术扩增507bp的布鲁菌OMP16蛋白编码基因pal,并克隆至原核表达载体pET32a(+),成功构建了pET32a—pal重组质粒,经IPTG诱导,证实目的蛋白以可溶性形式高效表达,利用离子交换层析纯化重组蛋白,纯度可达95%。将重组蛋白免疫小鼠,并测定其免疫指标,结果表明rOMP16免疫组小鼠脾淋巴细胞所分泌的IFN-γ显著多于对照组,而IFN-γ可以直接保护被布鲁氏菌感染的机体;同时IgG1抗体高于IgG2a;通过细胞因子和CD分子测定表明重组蛋白以诱发ThⅡ型免疫为主。本研究证明了布鲁氏菌rOMP16是一种优秀的免疫优势抗原,免疫学评价显示其有一定的应用前景,但诱导的免疫反应还不够强,因此有必要在用量、投递系统及佐剂方面进行摸索,以期最大限度的激发免疫应答。

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