【摘要】：目的:构建巴马小型猪1号染色体文库,为巴马小型猪1号染色体特异探针的筛选、遗传图谱的构建、重要基因的克隆以及与其它染色体的鉴别等研究提供基础。方法:本研究以巴马小型猪为材料,利用玻璃针显微分离猪有丝分裂中期的1号染色体,并将显微分离的染色体进行简并寡核苷酸引物PCR (DOP-PCR)扩增。以第1次PCR扩增产物为模板进行第2次PCR扩增以增加1号染色体扩增产物的量,然后以第2次PCR扩增产物为模板,用猪1号染色体上已定位的微卫星标记SW970为扩增目的基因,对DOP-PCR扩增产物进行鉴定。同时,将第二轮PCR产物用生物素-DUTP标记后的染色体涂染探针与玻片细胞进行荧光原位杂交(FISH),以便进一步确定扩增产物的来源。通过微卫星和FISH鉴定了DOP- PCR扩增产物与巴马小型猪的基因1号染色体的同源性。随后将鉴定后的第二轮PCR产物与质粒连接后,转化入大肠杆菌中,以构建巴马小型猪的1号染色体DNA文库。结果:通过染色体显微操作技术成功的分离了猪的1号染色体,经DOP-PCR扩增后,其扩增片段大小主要在0.2～1.2kb之间,平均600bp左右。微卫星鉴定和FISH鉴定结果显示,DOP-PCR的扩增产物与猪的基因组DNA同源,并且来源于猪的1号染色体。染色体扩增产物转化入大肠杆菌中,得到了巴马小型猪的1号染色体DNA文库。从文库中随机挑取了50个重组子进行分析,发现插入片段大小主要分布在100～600bp之间。讨论:本试验采用已定位于猪1号染色体微卫星标记SW970来验证微分离染色体的来源,结果得到相应的目的条带,其大小与已定位的序列一致,说明了扩增产物来自所分离的巴马小型猪1号染色体。为了进一步确定染色体来源,采用FISH技术与玻片上的间期细胞杂交,结果从玻片细胞上检测到了明显的杂交信号,进一步确定了扩增产物来源于猪的1号染色体。随机挑取一部分重组克隆的质粒进行酶切鉴定,结果显示插入的片段大小主要集中在100～600bp,说明本实验成功构建了猪的1号染色体文库。该文库的构建,为进一步研究猪的分子遗传标记、基因作图、QTL连锁分析、重要基因的定位和克隆以及分子标记辅助育种(MAS)等打下基础,也能为其他动物的染色体显微切割及微克隆提供经验。