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猪链球菌2型荚膜多糖cps2J基因的克隆与表达

刘燕  刘军  冯书章  郭学军  孙洋  祝令伟  
【摘要】:利用PCR的方法,从猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)四川资阳分离株449-1扩增出cps2J基因,克隆到pMD18-T载体中,构建质粒pMD18T-cps2L以SalⅠ和BamH1从pMD18T-cps2J中切下目的cps2J基因片段并克隆到质粒pMAL-p2X中,构建重组表达质粒pMALp2X-cps2J,转在宿主菌TB1中进行诱导表达。SDS-PAGE电泳检测结果表明,重组菌株表达出了136 kD左右的目的蛋白MBP-cps2J,目的蛋白为可溶表达,约占菌体蛋白总量的13.5%。表达的蛋白可用Amylose树脂层析柱纯化。将纯化的融合蛋白MBP-cps2J免疫家兔,利用制备的抗血清经ELISA和协同凝集试验检测,与SS2型呈特异性阳性反应。本试验研究了SS2型cps2J的克隆与高效表达,并将协同凝集试验用于SS2型检测。

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