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绵羊高硫角蛋白启动子(B2C)表达活性研究

王春生  杜文敬  原璐  安铁洙  
【摘要】:角蛋白是羊毛主要结构蛋白,是皮肤、毛发和指甲等组织的重要组成成分。为了探明高硫角蛋白在绵羊成纤维细胞和小鼠胚胎中的表达活性,本实验以绵羊基因组为模板,克隆了高硫角蛋白基因启动子B2C,并连接到pBS-T载体上经PCR和酶切鉴定。其结果,经测序B2C启动子序列大小为303bp,与GenBank上X02925有100%的同源性。在108位点有一个CAAT box,在241位点有一个TATA box。该启动子与去掉CMV启动子的pAcGFP1-N1载体连接,构建以绿色荧光蛋白为报告基因的重组真核表达载体。采用阳离子脂质体法转染传代培养的绵羊成纤维细胞和去除透明带的小鼠胚胎(8细胞期前),结果表明,在转染后48小时,在蓝光激发条件下可以检测到绵羊成纤维细胞核内及附近有绿色荧光蛋白的高表达,72小时后逐渐减弱,但细胞质内绿色荧光蛋白的表达量增加;与其相比,小鼠胚胎细胞中未能观察到绿色荧光。表明B2C启动子在成纤维细胞具有表达活性,而在小鼠的早期胚胎中可能不具有表达活性。本研究结果为利用高硫角蛋白基因启动子B2C构建羊毛特异表达载体提供依据。

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