【摘要】:为获取小鼠Ii编码基因,利用原核表系统进行诱导表达,提取与纯化目的蛋白,并制备其相应抗体。应用RT-PCR获取小鼠Ii编码基因;插入pGEX-4T-1表达载体,SDS-PAGE分析蛋白表达;纯化融合蛋白,免疫家兔,制备抗血清。扩增出了与预期大小相同的700bp的特异性基因条带,其与GenBank登录的鼠Ii同源性高达99.2%~99.8%;SDS-PAGE检测到大小约49.5kd的特异性蛋白条带;应用琼脂双向免疫扩散、间接ELISA、Western blot、间接免疫荧光法等进行抗体活性鉴定,证明获得了特异性强、具有良好生物活性的抗体。本试验为内源性靶向Th细胞表位疫苗、肿瘤的免疫与治疗及Ii在免疫应答中的促进作用奠定了一定基础。
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