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猪产毒多杀性巴氏杆菌毒素PMT的提纯、对Vero细胞生物学活性及其毒素抗体的制备

汤细彪  满晓营  杨明柳  何华  赵战勤  吴斌  陈焕春  
【摘要】:将猪产毒多杀性巴氏杆菌(T+Pm)增菌后经超声波破碎,用DEAE-52阴离子交换柱和Sephadex G-200处理,提纯天然毒素PMT。Western blot和细胞活性试验证实,该毒素具有良好的反应原性,且7ng/mL的PMT能使Vero细胞病变。应用该毒素制成的类毒素菌苗免疫2头健康断奶仔猪,同时设T+Pm灭活苗和PBS对照组。4免后,琼脂扩散试验检测类毒素菌苗组毒素抗体效价达1:16,而灭活苗组未见毒素抗体产生。用200μg提纯PMT和50亿T+Pm混合液经耳静脉加强免疫各组试验猪,结果对照组和灭活苗组试验猪在攻毒后出现明显的急性败血症状,未产生毒素抗体;类毒素菌苗组试验猪10天后耐过,经颈动脉采血收集高免血清,效价达1:32。综上,该毒素具有良好的免疫保护效力,制备的毒素抗体可为下一步研制猪产毒多杀性巴氏杆菌快速诊断试剂奠定基础。

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