柔嫩艾美耳球虫YZ株SO7基因在大肠杆菌中的高效表达

【摘要】：根据已克隆的E．tenella YZ株折光体SO7抗原基因的cDNA序列设计一对引物,应用聚合酶链式反应(PCR)技术从阳性质粒模板中扩增出SO7基因不含信号肽的编码区片段。将该基因片段酶切回收后按正确的阅读框架克隆人大肠杆菌表达载体pGEX-6P-1谷光甘肽-S-转移酶基因的下游,构建重组表达质粒 pGEX-6P-1-SO7,经测序验证正确。重组菌经过IPTG诱导后,通过SDS-PAGE电泳和Western-blot证实, S07基因在大肠杆菌中得到了融合表达,融合蛋白分子量约为48 KD,融合蛋白表达量约占菌体总蛋白的 37．5％。可溶性分析表明,融合蛋白主要以包涵体形式存在．通过融合蛋白切胶免疫小鼠制备高免血清,经过问接ELISA检测其与E．tenella子孢子抗原反应的特异性,结果证实融合蛋白具有一定的免疫原性,为下一步研究重组基因工程疫苗创造了一定的条件。