秀丽隐杆线虫肌动蛋白启动子Act-1的克隆和分析

【摘要】：秀丽隐杆线虫作为一种模式线虫,在进化上与寄生性线虫的关系最近,并且具有线虫的一些保守分子生物学特性,如反式剪接;并且秀丽隐杆线虫是多细胞的有机体,与包括人在内的许多高级生物有一些共同的特征。因而认为选用秀丽隐杆线虫来表达寄生性线虫的疫苗候选抗原可能会更接近寄生性线虫的天然抗原。但这样就不可避免地会产生大量的副作用,如蛋白异位表达毒性等问题。为了克服这种问题,国外学者通过将肌动蛋白(Act-1)启动子等基因与外源基因相连,使得外源基因仅表达在需要的部位。取得了较好的效果,国内还未见秀丽隐杆线虫这方面的研究报道。参照已发表的秀丽隐杆线虫Act-1基因序列设计引物,以秀丽隐杆线虫基因组DNA为模板,进行PCR扩增。将PCR产物与pUCm-T载体连接后,转化至DH5a 感受态细胞,筛选出阳性克隆并测序。序列分析表明,Act-1启动子基因其序列高度保守,与Genebank报道的序列一致,且具有许多独特的特征,这将为寄生虫DNA疫苗研究奠定基础。