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猪囊尾蚴18 kD蛋白基因的克隆、表达及其序列分析

赵光辉  张改平  宁长申  王选年  张龙现  石团员  宋海涛  鲁琨  
【摘要】:为在体外获得高纯度的猪囊尾坳病的诊断抗原,本实验克隆了猪囊尾坳18kD蛋白的基因,并用 Clustal X、DNASTAR 5和Anthprot 5.0软件对其核苷酸和氨基酸序列进行了分析,发现:本实验所测序列与AF350071的核苷酸同源性为92.3%,氨基酸同源性为83.7%,核苷酸在48位的T-G、53位的T-C、59位的G-A、109位的A-T、112位的T-A、126位的T-C、132位的T-C、150位的A-T、174位的C-T、180位的T-G、 182位的A-T、184位的A-G、187位的G-A、191位的A-T、193位的G-A、205位的A-G、208位的T-A和211 位的T-C发生了突变,氨基酸在19位的L-S、20位的E-G、37位的I-F、38位的F-I、50位的K-N、60位的N-K、 61位的E-V、62位的T-A、63位的V-M、64位的Q-L、65位的E-K、69位的K-E、70位的F-I和71位的W-R 发生了突变。根据Gamier和Robson等人的方法可以预测该蛋白二级结构中有5个α螺旋和5个β转角,没有β折叠;而根据Chou和Fasman等人的方法可以预测该蛋白的二级结构中有3个α螺旋、1个β折叠和3个β转角。通过对其功能预测发现,18kDa蛋白的1-18位氨基酸构成了一段强的疏水区域而且其抗原性较弱。抗原表位预测显示,19-34位、43-49位、65-70位和77-88位为抗原表位。通过Anthprot 5.0软件预测发现该蛋白的15-20位氨基酸处有一信号肽裂解位点,说明1-18位氨基酸为信号肽序列,揭示了该蛋白为一种分泌表达蛋白。将该基因克隆人真核表达载体pcDNA 3.0中,转染入COS-7细胞中,用ELISA方法检测发现,细胞培养上清中有诊断蛋白表达,并且48h的表达量比72 h的低。这为囊尾蚴病的抗体检测方法的建立和抗原检测方法的建立提供了基础。

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