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SiRNA对小鼠胎儿成纤维细胞IGF-IR基因表达的抑制

李树峰  佟慧丽  孙洪霞  周穷  严云勤  
【摘要】:胰岛素样生长因子I受体(IGF-IR)广泛表达于多种类型的细胞表面,它介导胰岛素样生长因子-1(IGF-Ⅰ)和大部分胰岛素样生长因子-2(IGF-Ⅱ)的生物学活性,可促进机体的蛋白质和核酸的合成以及碳水化合物的代谢,与细胞的生长分化,胚胎的发育密切相关。IGF-IR介导的信号转导通路在促有丝分裂活性,正常细胞向恶性细胞转化及抗细胞凋亡等方面的作用已受到广泛关注。而RNAi技术作为一种新兴的基因阻断技术也被广泛的应用于基因功能的研究上,但目前应用RNAi技术阻断IGF-IR表达的报道还很少。本实验设计了2条IGF-IR编码序列的反向重复序列,合成序列的两端设计有BamHI和HindⅢ的粘性末端,变性后退火并连接到相同酶切后的SiRNA表达载体上,并用之转染小鼠胎儿成纤维细胞(MEFs);G418筛选出阳性克隆,RT-PCR 法检测IGF-IR基因的表达情况。测序结果表明构建载体与设计完全一致,在siRNA表达载体转染的细胞中没有检测到IGF-IR mRNA的表达。本实验成功的对MEFs的IGF-IR的表达进行了抑制, 为进一步了解IGF-IR介导的信号转导通路及其功能的研究奠定了基础。

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