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猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白的表达及其单克隆抗体的制备

周艳君  安同庆  薛强  仇华吉  刘金霞  王云峰  田志军  彭金美  童光志  
【摘要】:将猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)CH-1a株GP5蛋白编码基因的信号肽序列删除后,克隆于pGEX-6p-1载体中,转化大肠杆菌,并进行诱导表达。经SDS-PAGA分析发现,表达的重组融合蛋白rtGP5大小约42 kDa,Westernblot分析证实,重组蛋白能被PRRSV抗血清所识别。收获融合表达的rtGP5,按50μg/只的剂量与等量弗氏佐剂乳化后,经腹腔接种BALB/c小鼠,免疫3次后,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,用rtGP5作为包被抗原,通过间接ELISA方法筛选阳性克隆,结果获得了15株能稳定分泌抗rtGP5蛋白抗体的杂交瘤细胞株。间接免疫荧光检测结果发现,所获得的15株单克隆抗体都能与PRRSV感染细胞产生特异性免疫荧光。亚型鉴定结果显示,15株单克隆抗体均为IgG1型,其轻链均为κ链。本研究获得的单克隆抗体将为今后深入研究PRRSV病毒结构和功能,分析GP5蛋白的抗原表位,设计有效的新型疫苗等提供有益帮助。

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