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SARS冠状病毒未知蛋白5的原核表达

王红霞  孟庆文  刘永刚  施建忠  孔宪刚  冉多良  吴东来  
【摘要】:经反转录聚合酶链式反应(Revers-Transcription Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)扩增了SARS冠状病毒(SARS-CoY)BJ01株的PU5基因(putative uncharacterized gene 5)的cDNA,将其克隆到原核表达载体pGEX-6P-1中,命名为pGEX-PUS,测序正确后将阳性质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,表达的融合蛋白命名为pGEX-PUP5,并用Glutathione SwpharoseTM 4B亲和层析柱对表达产物进行纯化,然后用PreScission TM Protease酶对融合蛋白进行解离,获得PUP5蛋白,用抗SARS-CoV卵黄抗体IgY和GST-tag单克隆抗体分别对表达的目的蛋白做Western blot鉴定,证明所表达的蛋白具有免疫学活性。本研究应用原核表达系统表达了PUP5蛋白,为进一步解析该蛋白功能奠定了基础。

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